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In-vitro-Wirkung von Fluorid Mundhygiene Tabletten auf künstliche Kariesläsion Bildung und Remineralisierung im menschlichen enamel

 

Zusammenfassung
Hintergrund
Ziel dieser In-vitro-
-Studie war die Remineralisierung Potential einer Zahnreinigung zu beurteilen Tablette mit unterschiedlichen Fluoridgehalt.
Methoden
Dreiundzwanzig kariesfreien betroffen dritten Molaren untersucht wurden, waren Schmelzoberflächen Wachs zwei 3 x 4 mm Fenster für die Belichtung mit Entmineralisierung /Remineralisierung Zyklen beschichtet verlassen. Die Zähne wurden randomisiert vier Gruppen von 5 Kontrolle und 6 experimentelle Zähne zugeordnet. Demineralisierung durch standardisierte HEC-Gel, pH 4,7 bei 37 ° C für 72 h, wurde durch Spülen in Remineralisierung Lösung alterniert, pH 7,0 bei 37 ° C für 72 h, Gesamtbehandlungszeit 432 h. Die negative Kontrollgruppe N wurde während Remineralisierung Zyklen mit Kochsalzlösung behandelt; positive Kontrollgruppe P wurde mit Remineralisierung Lösung behandelt; Versuchsgruppe D1 wurde Remineralisierung Lösung ausgesetzt enthält Denttabs ®-Tabletten mit 1450 ppm F; Versuchsgruppe D2 wurde Remineralisierung Lösung ausgesetzt und Denttabs ®-Tabletten mit 4350 ppm F. wurde jeder Zahn in serielle Abschnitte geschnitten und durch Polarisationsmikroskopie für die Beurteilung der verschiedenen Zonen der weiß-Spot-Läsionen in drei repräsentativen Abschnitten analysiert. . Die statistische Analyse wurde auf der Grundlage der Mann-Whitney
-Test
Ergebnisse
beiden Kontrollgruppen N (-) und P (+) zeigte charakteristische weiße-Spot-Läsionen. Die Remineralisation und die Entmineralisierung Hemmung der erheblich von N & lt erhöht Läsionen; P & lt; D1 & lt; D2. Denttabs ®-2 Verabreichung zeigte teilweise /Gesamt Remineralisierung einschließlich Laminierung und /oder Verschwinden des Körpers der Läsion. Die unterschiedlichen Ergebnisse aller vier Gruppen waren statistisch hoch signifikant (p & lt; 0,01). Mit beiden Tests
Schlussfolgerung
Auf der Grundlage dieser Ergebnisse die neuartige Denttabs ® Formulierung, die eine hochwirksame Mundhygieneprodukt und die Remineralisierung darstellt . korreliert ist mit dem Fluoridgehalt
Peter Gängler, trug Thomas Kremniczky gleichermaßen zu dieser Arbeit elektronische ergänzendes Material
die Online-Version dieses Artikels
(doi:.. 10 1186 /1472-6831-9 -25) enthält zusätzliches Material, das autorisierten Benutzern zur Verfügung steht.
Hintergrund
Fluoride Zahncremes sind weit verbreitet, und es ist experimentell gut etabliert, dass sie auf die Remineralisierung der beginnenden Kariesläsionen in der Human- und Rinderschmelz beitragen [1- 3]. In den letzten zehn Jahren viele Fragen wurden auf die Bioverfügbarkeit von Fluorid in oralen Flüssigkeiten und neue Formulierungen mit unterschiedlichen Fluoridgehalt werden derzeit untersucht angehoben. Kürzlich wurde gezeigt, dass erhöhte Fluoridprodukte Remineralisierung von fortgeschrittenen Rinderschmelzläsionen verbessern [4].
Auf der anderen Seite, die lange oder sogar das Leben lange Anwesenheit des Gebisses Mensch mit diätetischen Einflüssen kombiniert und individuelle Zahnputzgewohnheiten führen kann dem Risiko erosive und /oder abrasive Läsionen von Zahnschmelz und insbesondere Dentin root. Es war daher das Ziel der Entwicklung eines Mundhygienemittel in Tablettenform, die Fluorid Verfügbarkeit in Mundflüssigkeiten zu erhöhen und die Abriebwirkung von vielen traditionellen Zahncremes durch eine Polierwirkung aufgrund mikrokristalline Hydroxyethylcellulose zu substituieren. Das resultierende Produkt (Denttabs ®, proDentum, Berlin, Deutschland) schnell im Speichel gelöst und die Fluorid Bioverfügbarkeit immediatedly nach dem Zähneputzen und 10 Minuten nach dem Zähneputzen ist höher (Median 165,2 ppm F -) im Vergleich zu ein herkömmlicher Zahnputzmittel Schaum /Speichel-Mischung (Median 123,7 ppm F -). auch (. Naumova et al, Fluoride Bioverfügbarkeit im Speichel nach der Verwendung von DENTTABS ® im Vergleich zu Zahnputzmittel, eingereicht)
Die Mundhygiene Tabletten klinisch getestet, und die Plaque-Effizienz war zu einem herkömmlichen Zahnputzmittel in einer Feldstudie sowie in einer kontrollierten klinischen Studie ähnlich zu reduzieren [5].
blieb die Frage, ob eine zusätzliche Fluorid Verstärkung der Remineralisation für eine erhöhte erwartet werden konnte Fluoridgehalt von 4350 ppm im Vergleich zu 1450 ppm in Denttabs ®. Die höhere Fluoridkonzentration in 0,33 g Tabletten gleich 1450 ppm F -. Pro 1,00 g Zahnpasta als gemeinsame Menge pro Anwendung
Es war daher das Ziel dieser Studie, die die relative Wirksamkeit von zwei Fluorid-Behandlungen auf zu beurteilen Entmineralisierung und Remineralisierung des menschlichen Zahnschmelz in einem pH-cycling-Modell. Qualitative und semi-quantitative Mikroskopie mit polarisiertem Licht von seriellen Anschliffe wurde verwendet, um die Morphologie der Läsionen zu detektieren und die Porenvolumen von De- und Remineralisierung zu beurteilen. Polarisationsmikroskopie wurde als Verfahren gewählt, um die Morphologie der einzelnen Läsionen zu bestimmen, weil es zwischen den verschiedenen Zonen Läsion Scheidungs ​​ermöglicht. Auch das Ausmaß der verschiedenen Läsionen Zonen könnten genau gemessen werden.
Methoden
Tissue
Dreiundzwanzig vollständig beeinflusst menschliche dritten Molaren in Übereinstimmung mit den GLP-Anweisungen verwendet, um die Verwendung von menschlichem Gewebe regeln. Diese Zähne wurden aufgrund der einheitlichen Schmelzstruktur ohne individuellen Herausforderungen ausgewählt aufgrund der Nicht-Exposition in der Mundhöhle. Unmittelbar nach der klinisch indiziert chirurgische Entfernung wurden sie gründlich von organischen Ablagerungen gereinigt und in Kochsalzlösung, die 0,1% Thymol gespeichert. Keine weitere Oberflächenbehandlung des Zahnschmelzes aufgebracht. Die Zähne wurden als beschichtet mit Wachs einer 3 × 4 mm-Fenster auf der bukkalen und lingualen glatten Oberflächen und schließlich zufällig zugewiesen zu 4 Gruppen (Tab. 1) .Tabelle 1 Insgesamt experimentelles Design
Verlassen Group

Demineralisation

Remineralization

Teeth

Lesions


N
(Negativkontrolle)
Standardisierte
HEC-Gel
pH 4,7, 37 ° C
Saline
37 ° C
5
10
P
(positive Kontrolle)

Remin. Lösung
pH 7,0, 37 ° C
6
12
D1
(experimentell)

Remin. Lösung + Denttabs® 1450 ppm F-
pH 7,0, 37 ° C
6
12
D2
(experimentell)


Remin. Lösung + Denttabs® 4350 ppm F-
pH 7,0, 37 ° C
6
12
Entmineralisierung /Remineralisierung, pH-Cycling
pH-Zyklusbedingungen wurden fortgeschrittener künstlicher Schmelzläsionen auf natürliche glatte Oberflächen zu schaffen gewählt. Jeder Zyklus wurde 3 Tage geplant und wurde 6 mal wiederholt. Die Versuchsdauer von pH-cycling dauerte daher 18 Tage. Nach Entsalzung und Remineralisierung (mit Ausnahme der negativen Kontrollgruppe) wurden die Proben in destilliertem Wasser gespült, um überschüssige Behandlungs Gel-Lösung zu entfernen. Entmineralisierung Gel enthielt 1,5 mM CaCl 2, 0,9 mM KH 2PO 4, 150 mM KCl, 0,1 M Natriumacetat-Puffer, 30 mM Acetat in hydroxyehtyl Cellulose. Der pH-Wert wurde auf 4,7 eingestellt und kontrolliert vor und nach jedem 3 Tage Zyklus [6].
Remineralisierung Lösungen wurden, bestehend aus 1,5 mM CaCl 2, 0,9 mM KH 2PO 4 und 150 mM KCl bei pH 7,0, gesteuert wieder vor und nach jedem Zyklus 3 Tage.
die Wachs beschichtet Zähne mit Metalldrähten fixiert wurden und in den jeweiligen Lösungen (1) und das Volumen jeder Lösung wurden 100 ml hängen. Diese Lösungen wurden ständig gerührt, um einen Magnetrührer. Alle Zyklen wurden unter konstanten klimatischen Bedingungen bei 37 ° ausgeführt. Die Fensterflächen wurden microphotographically vor der pH-cycling kontrollierten Proben mit Schmelzrisse iatrogener Kratzer zu verwerfen und die künstlichen weißen Spot-Läsionen nach 18 Tagen zu dokumentieren. Abbildung 1 Aufbau der Inkubation Verfahren. Die wachsbeschichtete Zähne wurden zu Metalldrähten fixiert und wurden in den verschiedenen Inkubationsmedien hängt. Die Inkubation Medien wurden ständig mit einem Magnetrührer langsam gerührt. Die Behandlungsgruppen
ist
Das experimentelle Schema in Tabelle 1. Die negative Kontrollgruppe N von 5 Zähne with10 Läsionen unterzog Entmineralisierung Zyklen nur und wurde während der Remineralisierung Zyklen gehalten in Kochsalzlösung. Die positive Kontrollgruppe P von 6 Zähne mit 12 Läsionen wurde in der angegebenen Lösung ohne Fluoridgehalt remineralisiert. Die zwei Versuchsgruppen (D1 und D2) von 6 Zähne mit 12 Läsionen jeweils Remineralisierung Lösung ausgesetzt wurden, enthaltend Denttabs ® mit 1450 ppm F - (D1) oder Denttabs ® mit 4350 ppm F - (D2). Die Mundhygiene Tabletten enthalten Fluorid aus NaF, und die anderen Bestandteile INCI nach sind mikrokristalline Hydroxyethylcellulose, Kieselsäuregel, Natriumhydrogencarbonat, Natriumlaurylsulfat, Ascorbinsäure, Magnesiumstearat, Aspartam und Minzgeschmack.
Die Tabletten suspendiert wurden in die Remineralisierung Lösung mit einem Verhältnis von einer Tablette pro 5 ml Lösung, die die maximale Bioverfügbarkeit von Fluorid unmittelbar nach dem Bürsten (Naumova et al., Fluoride Bioverfügbarkeit im Speichel nach der Verwendung DENTTABS ® im Vergleich zu Zahnpflegemittel, eingereicht) zu simulieren.
Polarisationsmikroskopie (PLM)
Nach dem Entfernen der Wachsbeschichtungen standardisiert Mikro Fotos aller Läsionen bei 10-facher Vergrößerung aufgenommen wurden. Vor der weiteren Verarbeitung wurden die Wurzeln entfernt. Alle Zähne wurden dann in abgestuften Alkohol und eingebettet in Technovit 9100 (Kulzer, Weinheim, Deutschland) dehydriert. Serienschliffe wurden geschnitten mit einer Säge Mikrotom (LEICA CM 1900, Leica, Wetzlar, Deutschland) mit einer Dicke von 80 & mgr; m in Corono-apikal. Drei Schliffen pro Zahn, die zwei approximalen und einem mittleren Bereich der Läsionen wurden für die qualitative und semi-quantitative Beurteilung der Läsion Morphologie verwendet.
Die qualitative Bewertung der Läsion Zone Merkmale enthalten, die Homogenität der Oberflächenzone und des Körpers die Läsion die flächenspezifische Mineralverlust aufgrund veränderter Doppelbrechung von verschiedenen Porenvolumina imbibited mit Technovit darstellt 9100. Neben der Anwesenheit von Lamellen im Körper der Läsion und die nachweisbare durchscheinend Zone analysiert. Für die quantitative Analyse
das Ausmaß der jeweiligen caries artige Läsion Zonen (Oberflächenzone, des Körpers der Läsion, transluzente Zone) wurde in & mgr; m zu integrieren ihre Maximal- und Minimalwerte und Weiter in gleichen Abständen über die gesamte Läsion gemessen, bis 10 Messungen beurteilt. Drei Abschnitte jeder Läsion wurden für die Messungen ausgewählt. Statistik
Da die Daten keine Normalverteilung statistische Analyse zeigte, durchgeführt wurde unter Verwendung des nichtparametrischen Mann-Whitney U-Test und SPSS 14 als Computerprogramm. Die Signifikanz wurde bei p & lt bestimmt; 0.05.
Ergebnisse
makroskopische Aussehen
In allen vier Gruppen nach 18 Versuchstagen künstliche Karies ähnlichen Schmelzläsionen unterschiedlicher Intensität nachgewiesen wurden. Keine dieser Oberflächenerosion zeigten Läsionen, und die Oberflächenmorphologie bei 10-facher Vergrößerung war ähnlich Schmelz Ton um die Läsionen. Jedoch gab es einen deutlichen Unterschied der Erscheinung der Untergrund weiß-Spot-Läsionen. Die negative Kontrollgruppe N zeigte ziemlich homogen fortgeschrittenen White Spot-Läsionen, während in der positiven Kontrollgruppe P die weißen Spot-Läsionen waren weniger homogen mit Farbwechsel. Im Gegensatz beide Versuchsgruppen D1 und D2 führte zu weniger intensiven weißen Spot-Läsionen, und die am wenigsten unter der Oberfläche Entmineralisierung der Nähe von nicht nachweisbar weißen Flecken wurde für D2 (Abbildung 2) dokumentiert. Abbildung 2 Aussehen der experimentellen Läsionen. White-Spot-Läsionen in der Kontrollgruppe N (a), Remineralisierung Gruppe P (b), experimentelle Gruppe D1 mit Denttabs® 1450 ppm Fluorid (c) und Versuchsgruppe D2 mit Denttabs® 4350 ppm Fluorid (d).
Qualitative PLM Beurteilung
die charakteristischen Merkmale von 3 Schliffen pro Läsion sind in Tabelle 2 zusammengefasst die Oberflächenzone und der Körper der Läsion in der experimentellen D1 und D2 Gruppen waren weniger homogen wegen der geringeren Porenvolumen. Schichtungen innerhalb des Körpers der Läsionen wurden vorwiegend in experimentellen Gruppen D1 und D2 detektiert. D2-Gruppe zeigte teilweise oder vollständige Remineralisierung einschließlich Laminierung und /oder Verschwinden des Körpers der Läsion (Abbildung 3) .Tabelle 2 Qualitative polarisierte Lichtmikroskopie mit charakteristischen Eigenschaften der künstlichen Schmelzläsionen, Prozentsatz der seriellen Schliffen
< col> Gruppen
homogene Oberflächenzone
Körper der Läsion homogen
Vorhandensein von Lamellen
Nachweis von durchscheinend
Zone
N
100%
90,0%

- 85,0%

P
100%
87,5%
8,3%
95,8%
D1
83,3%
75,0%
37,0%
100%
D2
70,8%
62,5%
45,8%
100%
3 polarisiertes Licht mikroskopische Aufnahmen von morphologischen Beispiele für die vier Gruppen von Kontroll- und Versuchs Zähne. a) Negativkontrolle N: Homogene Oberflächenzone, demineralisiertem Körper der Läsion ohne Lamellen; Pfeil mit Stern = Oberflächenzone, Doppelpfeil = Körper der Läsion. b) Positive Kontrolle P: Homogene Oberflächenzone, kleiner Körper der Läsion nachweisbar durchscheinend Zone; Pfeil mit Stern = Oberflächenzone, Doppelpfeil = Körper der Läsion. c) Experimentelle Gruppe D1: homogene Oberflächenzone, kleine Band des Körpers der Läsion nachweisbar durchscheinend Zone Pfeil mit Stern = Oberflächenzone, Doppelpfeil = Körper der Läsion. d) Experimentelle Gruppe D2: Homogene Oberflächenzone, verschwinden Körper der Läsion mit Lamellen, breit durchscheinend Zone; gepunktete Linie mit skizzierten Pfeil = laminierte Körper der Läsion, Pfeil = Lamellen; Doppelkonturen Pfeil = transluzent Zone.
Quantitative PLM Beurteilung
Die Ergebnisse aller Messungen des Ausmaßes der Oberflächenzone, den Körper der Läsion und der transluzenten Zone sind in Tabelle 3 Die Oberflächenzone präsentiert von Gruppe N war signifikant verlängerte im Vergleich zu allen anderen Gruppen (p & lt; 0,01). Die Unterschiede in der Ausdehnung des Körpers der Läsion waren hoch signifikant die geringste Entmineralisierung für Gruppe D2 mit hohem Fluoridgehalt (p & lt; 0,001) zeigt. Das Ausmaß der Mineralverlust pro Läsion und pro Gruppe war N & gt; P & gt; D1 & gt; D2. Die lichtdurchlässige Zone war ausgedehntere in Gruppe D2 und statistisch hoch unterscheidet sich von allen anderen Gruppen (p & lt; 0,001). Dies wurde bestätigt durch den Kruskal - Wallis Test (p & lt; 0,001). Die Ergebnisse waren die gleichen für die gesamte Tiefe aller Läsion Zonen sowie für die minimale und maximale Ausmaß. (; P & gt; D1 & gt; D2 N & gt) .Tabelle 3 Umfang der Läsion Zonen in & mgr; m in den verschiedenen Gruppen

Oberflächenzone
Körper der Läsion

> Durchlässiger zone


Group

Median

Mean

STD

Median

Mean

STD

Median

Mean

STD


N

14,2

15,7

5,5

203,5

203,3

40,7

67,8

78,9

30,9


P

10,7

10,9

2,9

135,7

132

20,3

89,2

87,6

18,6


D1

10,7

10,5

3

71,4

72

13,1

75

79,3

22,6


D2

10,7

11,2

5,5

35,7

37,2

13

100

99,4

36,7


Diskussion
Frühere Studien der Naturgeschichte der menschlichen Zahnschmelz Kariesläsionen in Laub- und bleibenden Zähne unter Verwendung der dreidimensionalen Merkmale des polarisierten Lichtmikroskopie haben zum Verständnis der Dynamik der Kariesprogression beigetragen [7-9]. Die gleiche Methodik einschließlich der 3D-Rekonstruktion von künstlichen caries artige Läsionen und die Beurteilung des Volumens des Körpers der Läsion wurde zum Testen verschiedener Zahncremes [1] und unter verschiedenen pH-Bedingungen [10] genutzt. Die Größe, die Lautstärke und die Konfiguration dieser künstlichen Läsionen unterscheiden sich stark von den typischen Merkmalen der natürlichen frühen Beginn, verhaftet oder fortschreitenden Läsionen. Jedoch werden die Läsion Zonen in polarisiertem Licht nach Gustafson [11] die gleichen, und künstlich geschaffenen caries artige Läsionen sind weit verbreitet zur Erkennung der Regulierung der Mineralabscheidung und Auflösung [3] und zur Bestimmung der relativen Effizienz von Fluoridzahnpasten verwendet unter pH Zyklusbedingungen [2].
die Daten der vorliegenden Studie die Auswirkungen von Fluorid auf die Entmineralisierung und Remineralisierung von menschlichem Zahnschmelz bestätigen. Es wurde festgestellt, dass die Entsalzung Regime über 18 Tage erweiterte erstellt Karies-Läsionen mit homogener Oberflächenzonen und hohen Porenvolumen des Körpers der Läsion. Das Ausmaß war etwa 200 & mgr; m und unterscheidet sich von den positiven Kontroll Zähne in pH Radfahren mit Standard Remineralisierung Lösung mit einer Tiefe etwa 120 & mgr; m.
Die Fluorid Verfügbarkeit von 1450 ppm enthält, Mundhygiene Tabletten in der Remineralisierung Lösung wurde gleich 96 ppm ( eine 0,33 g Tablette pro 5 ml Lösung), was von einem herkömmlichen 1400 ppm Fluorid Bioverfügbarkeit entspricht F - Zahnputzmittel im Speichel sofort nach dem Zähneputzen (Naumova et al, Fluoride Bioverfügbarkeit im Speichel nach DENTTABS mit ® verglichen. zu Zahnputzmittel, eingereicht). Die erhöhte Fluorid Verfügbarkeit von ppm 4350 Mundhygiene Tabletten enthielt, betrug 287 ppm, was wiederum die Bioverfügbarkeit im Speichel simuliert nach Zahn mit Denttabs Bürsten ®.
In beiden Versuchsgruppen von Zähnen die Mineralverlust verringerte sich enorm und die in unterschiedlichem Maße des Körpers der Läsion war hoch signifikant. Die Läsion Tiefe der herkömmlichen Fluoridgruppe D1 betrug etwa 70 um, und der Körper der Läsion in der erhöhten Fluoridgruppe D2 war noch kleiner etwa 40 & mgr; m. Die lichtdurchlässige Zone unterschieden sich nicht in den Kontrollgruppen und in der herkömmlichen Fluoridgruppe D1. Allerdings wurde diese Zone vor Entmineralisierung deutlich verlängert mehr in der erhöhten Fluoridgruppe D2 hauptsächlich Hemmung der Demineralisierung im inneren Teil der Läsion im Vergleich zu Mineralaufnahme im äußeren Teil des menschlichen Schmelzläsion darstellt. Es gab auch eine starke Zunahme von Lamellen in der Nähe der Hälfte aller Abschnitte. Im Gegensatz dazu waren Lamellen sehr selten in der Remineralisierung Gruppe ohne Fluorid, und sie waren völlig abwesend nur in den Zähnen mit Entmineralisierung Zyklen. In naturweiß-Spot-Läsionen Lamellen sind kurz oder lang anhaltende Perioden unterschiedlicher Karies Herausforderung zugeschrieben [12, 13]. Ten Cate et al. [2] zeigte, dass Mineralaufnahme und Verlust in verschiedenen Tiefen innerhalb der Läsionen auftreten, und sie davon aus, dass Fluorid-induzierte Rekristallisation die Kristallite größer und weniger löslich in Säure hergestellt wurde. Unsere PLM-Funktionen bestätigen diese Hypothese, und sie zeigen eine klare Dosis-Wirkungs. Der deutliche Unterschied in der Mineralstruktur von künstlichen incipient Läsionen, verglichen mit der Schall Emaille, führt zu dem Phänomen der gleichzeitigen Remineralisierung und Entmineralisierung. Quantitative mikroradiographischen Untersuchungen nach der Anwendung von höheren Fluoridkonzentration zeigten einen Anstieg der Remineralisierung in der äußeren Läsion und eine Abnahme der Demineralisierung im inneren Teil, was zu einem deutlichen Anstieg der Mineralverstärkungs [3]. Es wurde vor kurzem diskutiert, die mit erhöhten externen F - Ebenen, die F - Gradienten könnte höher sein, das Fluorid tiefer in den erweiterten Läsion fahren, trotz der F - Diffusion durch Adsorption verlangsamt wird, auf und die Reaktion mit Hydroxylapatit-Kristallite [4]. Nach diesen Ergebnissen höhere Konzentrationen an Fluorid für das Fortschreiten der künstliche Karies artigen Läsionen zu verhindern. Daher ist die F - Bioverfügbarkeit bei der oralen Flüssigkeiten durch die vorliegende Studie Design simuliert eine bedeutende Rolle spielt die Remineralisierung des Zahnschmelzes Kariesläsionen bei der Verbesserung
Fazit
Abschließend Remineralisierung und Entsalzung von fortgeschrittenen menschlichen Schmelzkaries-like. Läsionen wurden gefunden von höheren Fluoridkonzentrationen (4350 ppm im Vergleich zu 1450 ppm) bei der Mundhygiene Tablette Behandlung in einem pH-Radfahren Modell profitieren.
Erklärungen
Danksagung
Die Autoren Frau Susanne Haussmann für ihre technische Unterstützung danken.
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Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben. ProDentum, Berlin, hat Deutschland die DETTABS® für diese Untersuchung hatte aber keinen weiteren Einfluss auf das Studiendesign.
Beiträge der Autoren
PG verantwortlich war, das Manuskript für das Schreiben. TK führte die Experimente und die Messungen. WHA war verantwortlich für die morphologischen Untersuchungen.
Alle Autoren gelesen und genehmigt die endgültige Fassung des Manuskripts.