Zusammenfassung
Hintergrund
Zahnkaries als Folge der den Stoffwechsel von Kohlenhydraten durch kariogene Bakterien in einem komplexen Biofilm entwickelt. Die vorliegende Studie zielte darauf ab zu untersuchen, ob Bakterien in gepoolten supragingival Plaqueproben quantifiziert ein "Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierung" basierten Panel von Karies-verwandten Bakterien verwenden, könnte die Karieserfahrung in einer ähnlichen Weise wie Speichelproben reflektieren analysiert mit einem Stuhl seitige Methode in einer früheren Untersuchung.
Methoden
insgesamt 86 Mütter und ihre Kinder 4-6 Jahre und 12-16 Jahre alt teilgenommen gealtert. Kariesbefalls (DMFT /dmft, verfallene, fehlende und gefüllte Zähne für eine dauerhafte und Milchzähne) wurde klinisch und radiologisch registriert. Caries wurde an der D
3-Ebene (Karies in Dentin) aufgezeichnet. Der D /d-Komponente wurde in drei Kategorien eingeteilt. Eine gepoolte supragingival Plaque Probe pro Teilnehmer wurde von posterior Approximal- Websites erhalten. Die Analysen von 15 Bakterienarten wurden unter Verwendung der Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik durchgeführt.
Ergebnisse | keine signifikanten Beziehungen wurden zwischen den Bakterien Partituren und DMFT /dmft noch D /d Gruppen gefunden.
Schlussfolgerungen
Im Gegensatz zu die Speichelproben und der Stuhl seitige Methode, analysiert interproximalen gepoolten Plaqueproben die "Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik" können keine signifikanten Beziehungen zwischen den Bakterienzahlen und der Karieserfahrung ergab.
Anette Carlén, Guglielmo Campus und Peter Lingström trugen gleichermaßen zu dieser Arbeit.
Hintergrund
Zahnkaries eine multifaktorielle Erkrankung ist durch eine Reihe von Schlüsselfaktoren ausgelöst und beeinflusst [1]. Darüber hinaus Speichel spielt eine wichtige Rolle, um die Zähne Integrität bei der Aufrechterhaltung von von kariogenen Bakterien und schützen die Zähne vor Karies erzeugt Säuren zu puffern. Saliva kann die orale Mikroflora beeinflussen, indem sie an der Zahnoberfläche zu adsorbieren, das erworbene Pellicula bilden, die bestimmt, welche Mikroorganismen in der Lage sind, zu befestigen und zu kolonisieren [2]. Speichels wurde als diagnostisches Werkzeug herkömmlich verwendeten Aktivität einzelnen caries zu bestimmen und das Risiko [3, 4]. Eine solche Bewertung umfasst, ist die Aufnahme von Speichelpufferkapazität und zählt von kariogenen Bakterien hauptsächlich S. mutans und Laktobazillen mit Stuhl-Side-Tests.
Obwohl Speichelanalyse zur Verfügung stellen kann einen allgemeinen Überblick über die mündliche Ökologie spiegelt die Kariesrisiko, Karies hauptsächlich ein Biofilm-induzierte Krankheit [5]. Das Betrachten dieser Biofilm (Zahnbelag) als ein komplexes mikrobielles Ökosystem wurde erweitert das Verständnis für ihre Rolle bei der Kariesentstehung und Progression [6]. Kariogene Plaques entstehen, wenn acidogene und aciduric Bakterienart folgende Hochfrequenz Kohlenhydrat-Exposition erhöhen. Die mikrobielle Stoffwechsel solcher Kohlenhydrate werden in der Versauerung des Biofilms führen, was wiederum zu Säure-induzierte Entmineralisierung der Zahnhartgewebe führen kann [6]. Eine der molekularen Techniken, die die vielfältigen mikrobiellen Zusammensetzung des Zahn Biofilm nachgewiesen haben, ist die "Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik" [7, 8]. Jedoch keine Karies spezifische Panel hat noch vorgeschlagen. Es wäre daher interessant sein, die schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik mit Karies spezifischen Panel verwenden, um die Beziehung zwischen den einzelnen Kariesbefalls und den Grafen von verschiedenen Karies bezogenen supragingival Plaque-Bakterien zu untersuchen. Die vorliegende Studie
wurde im Rahmen durchgeführt von eine Reihe von Studien über Saudi-Mütter und ihre Kinder. Ein Teil soll bei der Beschreibung der Erfahrung Karies in Bezug auf verschiedene kariesbedingte Faktoren und einen klaren Zusammenhang zwischen Stuhl-Seite Speichelkeimzahlen und Karies Erfahrung gefunden wurde [9]. Ein weiterer Teil wurde entwickelt, um festzustellen, ob gepoolt interproximalen Plaque-Proben die "Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik" analysiert könnte die Karieserfahrung widerspiegeln.
Die Hypothese dieser Querschnittsstudie ist, dass höhere Karies Erfahrungen mit höheren Zählungen verbunden sind Karies-verwandten Bakterien in supragingival Plaque. Das Ziel der vorliegenden Studie war daher zu prüfen, ob Bakterien in gepoolten supragingival Plaqueproben quantifiziert unter Verwendung eines "Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierung" basierten Panel von Karies-verwandten Bakterien, könnte die Karieserfahrung in einer ähnlichen Weise wie Speichelproben reflektieren analysiert ein Stuhl-side-Methode in einer früheren Untersuchung.
Methoden
Themen
die Studie ethische Genehmigung durch die Fakultät für Zahnmedizin an der King Abdulaziz University in Jeddah, Königreich Saudi-Arabien gegeben wurde. Die zahnärztlichen Aufzeichnungen an den Zahngesundheit und Notfallkliniken an der Fakultät für Zahnmedizin wurden gescreent geeignete Familie Kandidaten zu identifizieren. Die Studie umfasste 86 freiwillige Familien. Von jeder Familie (mittleres Alter 37,0 ± 4,5 Jahre), die Mutter und zwei ihrer Kinder, im Alter von 4-6 Jahre alt und 12 bis 16 Jahre alt (mittleres Alter 13,0 ± 1,4 Jahre) freiwillig (Alter 5,0 ± 0,9 Jahre bedeuten). Verbal Informationen über die Studie wurde an die Eltern gegeben und eine schriftliche Einverständniserklärung erhalten. Alle Untersuchungen wurden von einem der Autoren durchgeführt (AM).
Caries Registrierung
Der Status Gebisses ausgedrückt wurde mit der DMFT-Index (verfallene, fehlende und gefüllte Zähne) für bleibende Zähne und dmft für Milchzähne. Weisheitszähne wurden ausgeschlossen. Karies wurde klinisch und radiologisch am D 3-Ebene registriert [10]. Bissflügelaufnahmen für die einzelnen Teilnehmer getroffen, um Approximal- Zerfall aufzuzeichnen. Alle Approximalflächen im Gebiss von der mesialen Oberfläche der ersten Prämolaren /Milchmolaren an der distalen Oberfläche der zweiten Molaren /Milchmolaren enthalten waren.
Bakterielle Plaque-Proben
Pooled supragingival Tafel wurde von der approximalen Websites abgetastet zwischen den Zähnen 16/15, 25/26, 35/36 und 46/45 in den Müttern und älteren Kindern und Zähne 55/54, 64/65, 74/75 und 85/84 in den jüngeren Kindern mit sterilen Gracey Küretten. Wenn einer der Zähne in der approximalen Seite fehlte, wurde eine benachbarte Site verwendet. Jede Plaque-Probe wurde in ein Eppendorf-Röhrchen, die 150 μ
l sterilem TE-Puffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7,6) gegeben. Dann wurden 100 μ
l von 0,5 M NaOH wurde zu der Plaque-Pellet zugesetzt und die Bakteriensuspension wurde bei -20 ° C bis zur weiteren Verarbeitung gelagert. [11]
Schachbrett-DNA-DNA-Hybridisierung
Die Analyse der Bakterien Spezies wurde mit der schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungsverfahren durchgeführt [12]. Ganze genomische Sonden wurden aus den 15 Bakterienstämmen bekannt sind, hergestellt, um Karies verbunden zu sein, wie in Tabelle 1. Eine Bewertung der Keimzahl in den Proben gezeigt wurde durch Vergleich der erhaltenen Signale mit denen, die von den gepoolten Standardproben, die eine Zählung erzeugt ausgeführt von 10 6 und 10 5 jeder Bakterienarten sind. Die Signale wurden auf einer Skala von 0 bis 5 wie folgt codiert: 0 = kein Signal; 1 = ein Signaldichte schwächer ist als die der niedrigen Standard (& lt; 10 5 Bakterien); 2 = eine Signaldichte gleich zu der des niedrigen Standard (= 10 5 Bakterien); 3 = eine Signaldichte höher ist als die der niedrigen Standard, aber niedriger als die des hohen Standard (& gt; 10 5, aber & lt; 10 6 Bakterien); 4 = eine Signaldichte gleich der dem hohen Standard (= 10 6 Bakterien) und 5 = eine Signaldichte höher ist als die des hohen Standard (& gt; 10 6 Bakterien). Weitere Einzelheiten zur Technik in Bezug auf in Mannaa et al. [13]. Alle Bewertungen wurden von einem Prüfer durchgeführt (AM) .Tabelle 1 Die 15 karies verwandten Bakterienstämme für die Herstellung von DNA-Sonden verwendet, und einen weiteren Vergleich mit klinischen Karies Daten
Bakterielle Nomenklatur
Dehnungs Beschreibung & amp; Quelle
S. mutans
Streptococcus mutans
ATCC-25175
Streptococcus Sobrinus
CCUG-27507
Nicht S. mutans
Streptococcus mitis
ATCC-49456D-5
Streptococcus gordonii
ATCC-35105D-5
Streptococcus sanguinis
ATCC-10556D-5
Streptococcus salivarius
ATCC-9759D-5
Laktobazillen
Lactobacillus casei
ATCC-334D-5
Lactobacillus salivarius
CCUG-55845
Lactobacillus fermentum
OMGs -3182
Actinomyces
Actinomyces odontolyticus
NCTC-9935
Actinomyces oris
ATCC-12104D-5
Veillonella parvula
ATCC-10790D-5
Rothia dentocariosa
CCUG-17835
Bifidobacterium dentium
OMGs 1956
Parvimonas micra
ATCC-33270
Datenanalyse
Alle Daten wurden mit Hilfe der IBM ® SPSS ® Statistikpaket (PASW Version 18.0, IBM ®, Chicago analysiert, Ill ., USA). Der D /d-Komponente wurde in gering eingestuft: ≤ 1, mittel: 2-5 und hoch: & gt; 5 für die Mütter und ältere Kinder und niedrig: ≤ 3, mittel: 09.04 und hoch: ≥ 10 für die jüngeren Kinder. Cohen Kappa zur Bestimmung des intra-Prüfer Zuverlässigkeit der Registrierung caries wurde berechnet. Beschreibende Statistik, einschließlich der Mittel und Standardabweichungen wurden getrennt für die drei Gruppen berechnet. In Bezug auf die schachbrett Partituren, nur wenige Signal "0" Daten wurden aufgezeichnet und daher mit dem Signal "1" Daten in "≤1" zusammengefasst. Einweg-ANOVA wurde verwendet, um mittlere Unterschiede in der caries Erfahrung in Bezug auf die Bakterien Scores vergleichen. Fisher-Test wurde verwendet, um die D /d-Gruppen mit den Bakterien-Scores zu assoziieren. Das Niveau der statistischen Signifikanz wurde bei 5%.
Ergebnisse und Diskussion
Die Cohens Kappa-Werte für die Karies Anmeldung für die Mütter, jüngere Kinder eingestellt und ältere Kinder waren 0,88, 0,90 und 0,82 jeweils. Tabelle 2 fasst die Bakterienzahl für jede Spezies. Die Karies Erfahrungen (DMFT /dmft) der Mütter, jüngere und ältere Kinder sind für die 15 Bakterienstämme durch die Schachbrett-DNA-DNA-Hybridisierungstechnik in den Müttern erhalten in Tabelle 3.Table 2 Score Verteilung zusammengefasst, 4- bis 6-Jahr -old (C 4-6) und 12- bis 16-Jährigen (C 12-16) Kinder
Bakterienstämme
Schachbrett-Noten
Mütter
C4-6
C2-16
n = 86
n = 86
n = 86
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
S. mutans
77
8
1
0
0
68
15
3
0
0
10
76
0
0
0
S. sobrinus
6
80
0
0
0
79
3
4
0
0
9
77
0
0
0
S. sanguinis
17
69
0
0
0
19
66
1
0
0
68
17
1
0
0
S. salivarius
84
2
0
0
0
80
6
0
0
0
83
3
0
0
0
S. gordonii
67
16
3
0
0
67
16
3
0
0
66
16
3
1
0
S. mitis
72
12
2
0
0
72
10
4
0
0
74
12
0
0
0
L. casei
81
5
0
0
0
82
4
0
0
0
81
5
0
0
0
L. fermentum
84
2
0
0
0
82
4
0
0
0
84
2
0
0
0
L. salivarius
84
2
0
0
0
84
2
0
0
0
83
3
0
0
0
A. odontolyticus
83
3
0
0
0
80
6
0
0
0
81
5
0
0
0
A. oris
55
27
4
0
0
40
40
6
0
0
55
30
1
0
0
V. parvula
56
28
1
1
0
50
29
7
0
0
54
29
3
0
0
R.dentocariosa
74
12
0
0
0
72
14
0
0
0
71
14
1
0
0
B. dentium
81
5
0
0
0
81
5
0
0
0
83
3
0
0
0
P. micra
20
28
24
14
0
24
26
28
8
0
29
19
29
8
1
Table 3 Gebiss-Status (DMFT /dmft) und Kariesbefalls (D /d) in den Müttern, 4- bis 6-jährige (C 4-6) und 12- bis 16-Jährigen (C 12-16) Kinder
Variable
Mütter
C4-6
C12-16
n = 86
n = 86
n = 86
DMFT /flink (Mittelwert ± SD)
12,4 ± 5,3
9,0 ± 5,0
5,8 ± 4,1
D /d (Mittelwert ± SD)
5,5 ± 3,9
8,0 ± 5,1
4,5 ± 3,7
DMFT /flink = 0 (n [%])
3 [3.5]
8 [9.3]
10 [11.6]
D /d = 0 (n [%])
10 [11.6]
9 [10.5]
12 [14.0]
Low
17 [19,8]
23 [26,7]
23 [26,7]
Medium
31 [36,0]
25 [29.1]
32 [37.2]
hoch
38 [44.2]
Verteilung der Themen innerhalb der Werte auf der Schachbrett-Skala, mit der Mehrheit der Bakterienzahl
38 [44.2]
31 [36,0]
Es ein un-gleich war in die unteren Bereiche der Skala. Die Analyse zeigte keine Beziehung zwischen den Scores und der Bakterien caries Erfahrung für jede der karies verwandte Bakterien. Darüber hinaus wurden keine signifikanten Assoziationen zwischen den Bakterien Scores und den D /d Kategorien in den Müttern oder in ihren jüngeren oder älteren Kindern bis auf eine Tendenz in Bezug auf Streptococcus mutans
in Tabelle 4.Table 4 Verteilung beobachtet nachgewiesen, wie gezeigt von D /d in Bezug auf S. mutans-Scores in den Müttern, 4- bis 6-jährige (C 4-6) und 12- bis 16-Jährigen (C 12-16) Kinder
S. mutans Zahl
D /d
Mütter
C4-6
C12-16
Low
Medium
High
Low
Medium
High
Low
Medium
High
(≤1)
(2–5)
(>5)
(≤3)
(4–9)
(>9)
(≤1)
(2–5)
(>5)
1
17
29
31
20
18
30
23
30
27
2
0
2
6
3
4
8
0
2
4
3
0
0
1
0
3
0
-
-
-
The Mehrheit der Studien, die schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik haben sich auf das Studium bakteriellen Plaque Ökologie in Bezug auf Parodontitis [14-17] konzentriert. Diese Studien zeigten eine direkt proportionale Beziehung zwischen der Bakterienzahl und Zahntaschentiefe. Die vorliegende Studie konnte keine Beziehung zwischen den Grafen von supra- Bakterien und Karies Erfahrung (DMFT /dmft) demonstrieren. Eine Beziehung zwischen Karies Erfahrung und Karies bezogenen Speichelkeimzahlen (S. mutans und Laktobazillen) bewertet CRT Bakterien mit ® wurde in der gleichen Studie Probe gefunden [9]. In der vorliegenden Studie keine Beziehung zwischen den in den gepoolten Plaqueproben quantifiziert Bakterien und die Erfahrung Karies gefunden. Dies entspricht gut mit einer früheren Studie, in der eine stärkere Verbindung zwischen Karies und kariogenen durch Kulturtechnik im Vergleich zu dem Schachbrett-Methode wurde gefunden, analysiert Organismen [18]. Eine Reihe von Faktoren auf die Eigenschaften von Zahnbelag bezogen, Prozess der Karies Krankheit und die Wahl der Probenahmeverfahren kann die aktuelle Befund erklären. Die bakterielle Interaktion im Zahnbelag könnte einen größeren Beitrag zur Kariesentwicklung als die spezifische Zählung bestimmter kariogen Arten machen. Darüber hinaus unterscheidet sich die Plaque mikrobiellen Gemeinschaft in verschiedenen Stadien der Plaque Reifung (frühe Plaque im Vergleich zu
reifen Plaque). Außerdem ist die Lage der Messstellen und der Anzahl der Seiten, die die Beziehung ausgewählt beeinflussen. Die Zahl der Plaque-Bakterien könnten auch durch eine Reihe von Karies bezogenen andere Faktoren als die tatsächlichen Karies solche Erfahrung als Standort /Tiefe (Schmelz im Vergleich zu
Dentin), Stufe (einsetzenden gegen
kavitierter), betroffen sein werden ( akute, chronische oder verhaftet), und die Aktivität des kariösen Läsion (aktiv gegen
inaktiv). Darüber hinaus hat die schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik eine hohe Abschneidegrenze für bakterielle Quantifizierung Herstellung der Nachweis von Bakterien in niedrigen Zählungen problematisch, was durch Kreuzreaktionen kompliziert sein kann [19]. Schließlich ist die ungleiche Verteilung von Subjekten innerhalb der schachbrett Noten mit einer Mehrheit von niedrigen Keimzahlen in der vorliegenden Studie für den Mangel an signifikanten Ergebnisse verantwortlich sein könnte. Zusätzlich zu den zuvor erwähnten Nachteilen
gibt es zwei Einschränkungen des Abtastverfahrens in der vorliegenden Studie verwendet. Anders als mit Speichel, ist es schwierig, die Menge von Bakterien in einer Probe Plaque zu standardisieren. Standardisierung kann leicht mit Speichel erreicht werden, indem die Menge an Bakterien in einer 1-ml-Probe ausdrückt. Darüber hinaus schaffen Schwierigkeiten können supragingival Plaque in ein Reagenzglas Bündelung aller Bakterienzellen in einem sehr dichten Bakteriensuspension Lysieren [20]. Aus diesem Grund wurde schwere Plaque-Probenahme in der vorliegenden Studie minimiert, indem nur eine ausreichend sichtbare Menge an supragingival Plaque nehmen. Doch die Frage, ob zu wenig Plaque gesammelt wurde nicht ausgeschlossen werden kann.
Im Gegensatz zu der vorliegenden Studie Aas et al. zeigte, dass höhere Zählungen bestimmter Bakterienarten mit Gesundheit assoziiert waren, die Einleitung Karies und Progression Karies ein Reverse-Capture-Aufsatz mit [21]. Darüber hinaus analysiert die vorliegende Studie Proben gepoolten Plaque im Vergleich zu Proben aus verschiedenen caries anfälligen Stellen in der Mundhöhle. Darüber hinaus könnte die DMFT /dmft Index als rohes Verfahren angesehen werden, um die einzelnen caries Erfahrung zu beschreiben und vermittelt keine Informationen über Kariesaktivität. Eine Beziehung zwischen Plaque Bakterienzahlen und Karies Erfahrung gewonnen wurden, wenn die Untersuchung auf eine ortsspezifische Ebene durchgeführt worden war, und wenn Karies bezogenen Parameter wie Tiefe, Bühne und Aktivität war berücksichtigt worden.
Schlussfolgerungen
im Gegensatz zu den Speichelproben und der Stuhl seitige Methode, interproximalen gepoolten Plaqueproben analysiert unter Verwendung der "Schachbrett DNA-DNA-Hybridisierungstechnik" ergab keine signifikanten Beziehungen zwischen den Bakterienzahlen und der Kariesbefalls.
Hinweise
Anette Carlén, Guglielmo Campus und Peter Lingström trugen gleichermaßen zu dieser Arbeit.
Erklärungen
Danksagung
Wir möchten Ann-Britt Lundberg (Institut für Kariologie, Universität Göteborg) und Susanne Blomqvist (Department of Oral Mikrobiologie danken und Immunologie, Universität Göteborg) für ihre technische Unterstützung. Besonderer Dank geht an Dr. Nadia Al-Hazmi, Leiter der zahnärztlichen Aufzeichnungen und Archivierung, Dr. Sahar Bukhary, Leiter der Orale Biologie-Abteilung, und Dr. Motaz Ghulman, Prodekan für Studienangelegenheiten an der Fakultät für Zahnmedizin an der KAU, Königreich Saudi Arabien. Die Studie wurde von der saudischen Ministeriums für Hochschulbildung unterstützt.
Konkurrierende Interessen
Die Autoren berichten über keine Interessenkonflikte.
Beiträge der Autoren
Uhr im Studiendesign teilgenommen, Datenerhebung durchgeführt und Probenahme , lief Analyse der "Schachbrett-DNA-DNA-Hybridisierung", durchgeführt statistische Analyse und war für das Manuskript Schreiben verantwortlich. AC nahmen an der Studie Design und überwacht das Manuskript Schreiben. GC in der statistischen Analyse unterstützt und dazu beigetragen, das Manuskript zu entwerfen. PL nahmen an der Studie Design und überwacht das Manuskript Schreiben. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.
