Zusammenfassung
Hintergrund
parodontalen Entzündung wird durch Verletzungen in Kollagen, epithelialen, Knochengewebe gekennzeichnet. Die Hypothesen getestet werden sollten Beziehung zwischen dem s100, BCL2 und Myeloperoxidase in Gingivagewebe (MPO wirkt sich das Niveau der s100, BCL2). Das Ziel dieser Studie war es von s100 Ausdruck BCL2 Expression und Myeloperoxidase Ausdruck in parodontalen Entzündung zu untersuchen.
Methoden
27 Patienten (Riesenzell epulis) und 30 Patienten (akute und chronische Entzündungen) wurden in die Studie aufgenommen für s100 Ausdruck, BCL2 Expression und Myeloperoxidase Ausdruck durch Immunhistochemie und Hämatoxylin -. Eosin
Ergebnisse | Riesenzellen in epulis Positivität für Myeloperoxidase hat in 100% jedoch nur 75,31% der Riesenzellen waren positiv für BCL2 beobachtet Ausdruck. Akute 98,2% und chronische war 89,28% Entzündung für Myeloperoxidase eine signifikante positive. Die immunhistochemischen Ergebnisse der s100, Bcl-2 und Myeloperoxidase in epithelialen Schichten das Ergebnis von 100% zeigte, 82,2%, 100% positive Zellen in akuten und 100%, 78,25%, 100% bei chronischen Entzündungsprozess verbunden.
Fazit
die Ergebnisse zeigen, dass die Pathogenese der parodontalen Entzündung Hemmung von Zelltod, durch die Überexpression von Bcl-2 durch Ermittlung von Faktoren, Myeloperoxidase (Ergebnis der DNA-Schäden durch das Produkt der Katalyse) beinhalten könnten. Die höchsten s100 Aktivität haben an Standorten mit einer chronischen Entzündung gefunden.
Hintergrund
Bakterielle Infektionen sind die wichtigsten Erreger bei akuten und chronischen Parodontitis beteiligt sind, ist es multifaktorielle Erkrankung, die zur Zerstörung des Knochens führt Parodontiums [1]. Neutrophilen, T- & amp;: Entzündungszellen Infiltration von parodontalen Plasmazellen geführt worden B- Lymphozyten und Makrophagen [2]. Parodontale Läsionen wurden durch eine Persistenz von infiltrieren Entzündungszellen charakterisiert, die verantwortlich sind für die Knochen Resorcin Kollagene. Forschung von Baelum V. & amp; Lopez R. [3] gezeigt, dass Parodontitis zwischen 10% und 15% der Weltbevölkerung betroffen sind, hat das größte Ursache für Zahn zu sein.
Entzündungszellen (Plasmazellen) haben in Myeloperoxidase ausgedrückt. Polymorphkernige Neutrophile sind weitgehend die Myeloperoxidase in Plasmazellen [4] ausgedrückt. Die Myeloperoxidase-Gen liegt auf Chromosom 17 (17q23.1) [5].
Myeloperoxidase (MPO) die Synthese von mikrobiziden hypochlorige Säure-katalysierten haben ermöglicht, die Abwehr gegen Bakterien [6]. Weiterhin synthetisieren Plasmazellen Hypochlorsäure aus H
2 O 2 und NaCl. Hydroxyl-Radikal (OH) ist meist aktiv in schädlichen wichtige Moleküle wie DNA Proteinen und Lipiden [7]. Wasserstoffperoxid (H 2 O 2) a potent Mittel von Sauerstoffspezies ist, fähig ist, die Kernmembran überqueren und die DNA schädigen. [8] Es gibt immer mehr Unterstützung für die Behauptung, dass die Entzündung DNA-Schädigung induziert, die in periodontal Zellen zur Apoptose führt [9] Weiterhin können die apoptotische Stimuli Apoptose über verschiedene Mechanismen ausgelöst werden, einschließlich spezifischer Zelltod-Rezeptoren und Liganden, wie CD95 [10 ], Stresssignale, Moleküle direkt oder indirekt in die Apoptose über p53 induziert wird. BCL2 ist ein Mitglied der anti-apoptotischen Familienproteine, die verhindern kann, oder den Zelltod durch eine Vielzahl von Stimuli [11] induziert reduzieren. (; 18 14) [12] der BCL-2-Gen wurde in das Chromosom menschlichen t identifiziert. Der intrinsische Weg wird durch den Tod der mitochondrialen Freisetzung von Cytochrom c
, einen Prozess initiiert, die durch anti-apoptotische Proteine bcl2 inhibiert wird [13].
S100-Proteine in der Neutrophilen-Cytosol exprimiert, Monozyten, aktiviert Makrophagen und Keratinozyten und während der Aktivierung oder zum Tod dieser Zellen freigesetzt. Die S100-Gen-Familie umfasst mindestens 13 Mitgliedern, die als Cluster auf Chromosom 1q21 finden [14]. s100 Proteine auch als L1-Antigene bekannt, Calgranulin A und B, Makrophagen-Migration hemmenden Faktor-related Protein (MRP) und zystischer Fibrose Antigen, haben mehrere Funktionen bei Entzündungsreaktionen [15]., Die Ergebnisse von Sun-Hee Heo et . al. [16] haben die Expressionsmuster von S100A2 in Gingivagewebe während einer bakteriellen Lipopolysaccharide Stimulation gezeigt. S100A2 Expression durch bakterielle Lipopolysaccharide upregulated wurde.
Wir haben Hypothese besagt, dass es die Beziehung zwischen dem s100, BCL2 und Myeloperoxidase in Gingivagewebe (MPO wirkt sich die Höhe der s100, BCL2).
Ziel dieser Studie Sammlung
die Studie Proben wird die Expression von s100, BCL2 und MPO in Gingivagewebe auf verschiedenen Stadien der Parodontitis zu vergleichen und zu den Riesenzell epulis verglichen.
Methoden Patientenauswahl
und Gingivagewebe die periodontale und epulis Gewebe der Patienten eingeschlossen. Die Probanden wurden in zwei gleich große Gruppen eingeteilt:
Patientengruppe (Gruppe 1). Riesenzellgranulom Proben wurden von 27 Personen gesammelt, die eine morphologisch Diagnose von Riesenzellgranulom hatte (acht Männer und 14 Frauen, Altersbereich 30 bis 70 Jahre, mittleres Alter, 47,51 ± 12,37 Jahre).
Kontrollgruppe (Gruppe 2) bestand aus 30 Patienten, die in Sumy Regional Hospital gestorben war. Die Patienten hatten verschiedene somatische Diagnosen (nicht atherosklerotischen Komplikationen) und Zahn - parodontit. 17 Männer und 13 Frauen, Altersbereich von 43 bis 69 Jahren Durchschnittsalter 57,33 ± 8,31 Jahre untersucht wurden. Die Proben von bewachsen Gingiva wurden während Kiefer Sägen Verfahren gesammelt. Nach Gruppe 2 Gewebeproben von Hämatoxylin Eosin foo gefärbt wurden alle Proben in zwei Gruppen (akute und chronische) unterteilt. Die Kontrollgruppe hat zwei Untergruppen. Akute Untergruppen - 13 (5 Männer und 3 Frauen, Altersbereich von 43 bis 69 Jahren Durchschnittsalter 54,38 ± 7,9 Jahre). Chronische Untergruppen -. 17 (7 Männer und 15 Frauen, Altersbereich von 44 bis 68 Jahren Durchschnittsalter 59,58 ± 8,11 Jahre)
Schriftliche Einwilligung nach Aufklärung wurde von allen Probanden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Ukraine Health Council gegründet erhalten. Die vorliegende Studie wurde von der Sumy State University (Protokoll Nr 5/2012.) Genehmigt
Hematoxylin und Eosin (H & amp; E).
Stains seit mindestens einem Jahrhundert und sind nach wie vor für die Identifizierung verschiedener Gewebe verwendet worden Typen und die morphologische Veränderungen.
Immunfärbungen
Für s100, BCL2 und MPO wurden in Formalin fixierten (pH 7,4) Gewebe durchgeführt wurde. Paraffin eingebettete Gewebeschnitte wurden dy monoklonalen Maus-anti-s100 behandelt, anti-bcl2 und Anti-Myeloperoxidase (Thermo Fisher Scientific UK). Kurz gesagt, 4 um dicke Gewebeschnitte wurden in Xylol entwachst und wurden in Wasser durch abgestufte Alkohole gegeben. Antigen Retrieval durch microwaving Objektträger in 10 mM Citratpuffer (pH 6,2) für 30 min bei hoher Leistung durchgeführt wurde, nach den Anweisungen des Herstellers. Um die endogene Peroxidase-Aktivität zu entfernen, die Schnitte wurden mit frisch hergestelltem 1,0% Wasserstoffperoxid im Dunkeln für 30 min bei 37 ° C Temperatur behandelt. Nicht-spezifische Antikörper durch Bindung wurde Serum von Blockierung blockiert. Die Schnitte wurden für 30 min, mit den primären Antikörpern gegen s100, bcl2 und Myeloperoxidase verdünnt 1 bei 37 ° C Temperatur, inkubiert: 100 in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS), pH 7,2, dann a triple Waschen mit PBS folgt. Anti- (Maus IgG) -horseradish Peroxidase-Konjugat (1:40 000-Verdünnung) wurde zum Nachweis des S100, Bcl2 und MPO primariy Antikörper, dann wurden die Schnitte für 20 min inkubiert, bei 37 ° C Temperatur erfüllt. Die Farbe wurde durch DAB sichtbar gemacht.
Das Auftreten der positiven Faktoren wurde durch Zählen der positiven Riesenzellen in Gesichtsfeld semi-quantitativ nachgewiesen werden.
Die Daten wurden unter Verwendung von 8,0-Software STATISTICA analysiert, Version STA862D175437Q. Die Ergebnisse wurden als Mittelwert ± SD dargestellt. Die normalisieren Test haben die Verwendung vor der Analyse der Daten gewesen. Außerdem wurde der nicht-parametrisches Verfahren Schüler eine einfache vergleichende Analyse durchzuführen, angewendet. Der Wert von P & lt; 0,05 wurden als ein signifikant.
Ergebnisse | Die Gruppen 1 und 2 von Männern und Frauen bestand hauptsächlich Altersgruppe 30- bis 70-Jahren. Gruppe 1 Riesenzellen kam es im Unterkiefer (55%) häufiger als im Oberkiefer. In der Gruppe 2 sind die Patienten in 13 mit akuten und 17 mit chronischen Entzündungen aufgeteilt.
In Abb. 1a A wir beobachtete geringe Größe Zellinfiltration in einer akuten Entzündung. Signifikante Zellinfiltration und wuchernden Epithel (Abb. 1b) erschien intensiver in der chronischen Entzündung zu sein. Akute und chronische Entzündungszellen Leukozyten, Plasmazellen und Gewebe-Makrophagen zirkulieren. Bild 1 Die parodontalen Gewebe Hämatoxylin und Eosin (x100 Vergrößerung) A (a) - Jugend-Größe Zellen Infiltration mit überlagertem Ödeme, B (a) - Schichten des Epithels, C (b) - große Zellen Infiltration mit überlagertem Ödeme, D (a) - Epithelproliferation, E (c) - Blutung Zone, F (c) - Riesenzellen
Peripheral Riesenzelle epulis ist in Abb. 1c Die mikroskopische Untersuchung hat das Gewebe mit der Fülle von Riesenzellen ergab (Abb. 1c F), Bindegewebe, Bereiche der Hämorrhagien (Abb. 1c E) und wenige Kapillaren. Es gab keine Anzeichen von Malignität. Die chronische Entzündung, wenn die Makrophagen nicht verschiedene Partikel zerfallen, verschmelzen und mehrkernige Riesenzellen bilden. Außerdem morphologisch unterschiedliche Riesenzellen auch in einigen Tumoren erscheinen auch.
S100, Bcl-2 und MPO in Riesen-Zellen exprimiert wird. S100 Ausdruck, BCL2 Expression und Myeloperoxidase-Expression in Riesenzellen epulis sind in Abb. 2. Durch die Immunhistochemie, 100% der Riesenzellen erschien für Myeloperoxidase, positiv zu sein, während nur 75,31% der Riesenzellen für Bcl 2 (P & lt; 0,05) positiv waren. Durch die Tatsache, s100 Protein wurde in 10,72% der Riesen-Zellen exprimiert wird. Myeloperoxidase hat in plasmatischen Zellen von epulis 87,69% physiologisch ausgedrückt. und 11,28% bzw. bcl 2 und Myeloperoxidase Ausdruck ist schwach oder nicht vorhanden im Bindegewebe, s100 und bcl 2 haben in plasmatischen Zellen 24,34% (0,05 P & lt) ausgedrückt. Abb 2 Expression von s100, bcl2and Myeloperoxidase in Gingivagewebe (x100 Vergrößerung): A - Die Schichten des Epithels mit Myeloperoxidase Ausdruck, B - Blutzellen Infiltration mit Myeloperoxidase Ausdruck, C - perizellulärer und perivaskuläre Ödeme, D - Blutzellen Infiltration mit Myeloperoxidaseexpression , E - Schichten des Epithels mit Myeloperoxidase Expression und Proliferation, F - Riesenzellen mit Myeloperoxidase Ausdruck, G - fibroblastic Stroma, H - Blutzellen Infiltration mit Myeloperoxidase Ausdruck, I - perizellulärer und perivaskuläre Ödeme, G - Blutzellen Infiltration mit Bcl 2expression K - die Schichten des Epithels mit hohen bcl 2-Expression, L - Schichten des Epithels mit bcl 2expression, N - fibroblastic Stroma, M - Blutzellen Infiltration mit bcl 2-Expression, O - perizellulärer und perivaskuläre Ödeme, P - Riesen Zellen mit Bcl-2-Expression, Q - Blutzellen Infiltration mit niedrigen bcl 2expression, R - Blutzellen Infiltration mit s100 Ausdruck, S - perizellulärer und perivaskuläre Ödeme, T - Schichten des Epithels mit s100 Ausdruck, U - Schichten des Epithels mit niedrigen s100 Ausdruck, V - fibroblastic Stroma, W - Blutzellen Infiltration mit s100 Ausdruck, X - fibroblastic Stroma, Y - Riesenzellen mit "schlecht" s100 Ausdruck
der immunoexpression von s100, BCL2 Ende MPO (Gruppe 2) wurden bestätigt durch die Anwesenheit von Braun stained Zytoplasma in Zellinfiltration. Im Allgemeinen war s100 Färbung intensiver in den plasmatischen Zellen. In akuten inflamation S100 (Fig. 2) nur 36,2 ± 5,3% der Zellen schien positiv. Die Zellinfiltration, zeigte BCL2 Immunreaktivität 76,1 ± 3,3% (P & lt; 0,05) rechnete in akuten Prozess (Abb. 2). Myeloperoxidase wurde in 98,2 ± 5,9% (P & lt; 0,01) ausgedrückt. Positive Zellen bei der akuten Entzündung
Abbildung 2 zeigt die Ergebnisse der s100, BCL2 und MPO-Expression in chronischen Prozess
Myeloperoxidase 82. 28 ± 2,5% P & lt; 0,01 wurde bei chronischen plasmatischen Zellinfiltration während der Entzündung ausgedrückt. Bcl-2 wurde in chronischen plasmatischen Zellen Infiltration 55,67 ± 6,1% P & lt ausgedrückt; 0,05. Der Erbauer der immunoexpression von S100 in Zellinfiltration wurde das Ergebnis von 95,0 ± 0,31% positiven Zellen gezeigt.
Der Erbauer der immunoexpression von s100, BCL2 und MPO in Epithelien (akute Prozess) haben das Ergebnis von 100% gezeigt, 82,2 ± 2,93% bzw. 100%. Bei der chronischen Entzündungsprozess haben sich die positiven Zellen demonstratrd s100 - 100%, BCL2 - 78,25 ± 4,23% und Myeloperoxidase -. 100% bzw.
Diskussion
Diese Studie hat behauptet, dass MPO Lage war, höher zu stimulieren von BCL2 Expression in Entzündungszellen bei chronischen und akuten Prozess. Myeloperoxidase Aktivität, ausgedrückt in auf die Gingiva rekrutiert Neutrophile nach chemischen oder immunologischen Beleidigungen zu Gewebezerstörung beiträgt. Meloperoxidase könnte das Ausmaß und /oder die Schwere der parodontalen Erkrankungen beeinflussen [17].
Hohe Niveau der MPO wurden in Riesenzellen beobachtet. Erhöhte BCL2 Expressionsniveaus können zelluläre Apoptose verhindern, wodurch Entzündungszellen induzierende lokal in die periodontale Gewebe zu verbleiben, wodurch folglich übermßige Zytokinsekretion die die fortschreitende Zerstörung des periodontalen Gewebes führt [1]. Myeloperoxidase aus aktivierten Neutrophilen durch Degranulation freigesetzt werden nur in moderaten Mengen [18], und BCL2 Verfügbarkeit schützt Regionen. Cytolyse von Neutrophilen im Verlauf von Entzündungsbildung einen Freigabemechanismus zur Verfügung stellen könnte [18, 19] und das hohe Niveau der Myeloperoxidase und S100 erklären. Aktivität von S100A12 und C-reaktives Protein kann in chronischer Periodontitis [20] Marker inflammatorischer Aktivität sein. Frühere Studien haben vorgeschlagen, dass die Apoptose in der Pathogenese von entzündlichen Parodontopathien beteiligt ist [21]. Es hat sich auch gezeigt, dass die höhere Frequenz von Bcl-2-Expression führt zu einer fortschreitenden Zerstörung periodontal [22].
Gamonall et all. [23] hat mit Parodontitis nicht statistisch signifikanter Unterschied in varions Menge von BCL2 in gesunden Zahnfleisch und in Gingiva von Patienten gefunden. Unsere Studien haben den Blick auf Pandilova [24] und Ellis et all bestätigt. [25], dass eine chronische Progression der Entzündung Abnahme drückt bcl-2. In der menschlichen Gingivafibroblasten mit Entzündung Aktivierung von BCL2 hat sich in verschiedenen Stadien der Infektion und Riesenzell epulis beobachtet. Sule Bulut et all. [26] Ergebnisse zeigen, dass die Pathogenese einer induzierten Gingivawucherungen Cyclosporin Hemmung der Apoptose und die Überexpression von Bcl-2 in der Einstellung von hohen Serum Cyclosporin A beinhalten könnte Unsere Studie ein hohes Maß an BCL2 Expression und Hemmung der Apoptose in den Zellen unter Beweis gestellt hat von Gingivaepithel. Wir glauben, dass dies auf die Epithel Schutzfunktionen zurückzuführen ist. In Gingivaepithel wird s100 auch auf die Differenzierungsstadium im Zusammenhang mit [27]. Diese positiven Zellen sind dafür bekannt, Makrophagen oder Neutrophile [28] zu aktivieren. Forschung von Saito et al. [29] zeigten zahlreiche bcl-2-positive Epithelzellen in gingival-Biopsien von Patienten, die Nifedipin und Phenytoin einnahmen, was darauf hinweist, dass dieses Protein kann bei der Entwicklung von Nifedipin-induzierter Zahnfleischhyperplasie beteiligt sein. Wir glauben, dass die Anwesenheit von Bcl-2-Protein ist kein Indikator für die Riesenzelle epulis günstige Kurse.
S100 eine wichtige Rolle bei der Immunantwort spielt Parodontitis im Zusammenhang. s100 bindet 2 Ca2 + und 2 Zn2 + -Ionen. Wenn Zn2 + zu S100 bindet nimmt es seine Ca2 + Affinität. S100 interagiert auch mit p53 in einem Ca2 + -abhängig, die Stabilität der S100-p53 Interaktion beeinflusst [30] Das genannte s100-p53-Wechselwirkung führt zu einer Hemmung der Apoptose während der Entzündung. Das Bcl-2-Protein ist ein potenter Inhibitor von Zelltod, während die Wildtyp-p53-Protein mit der apoptotischen Weg aktiviert [5].
Mutiertes p53 diese Funktion verliert und ermöglicht es, die Proliferation von Tumorzellen. Bcl-2 moduliert auch die Funktion von p53 und löst die Zellproliferation und Transformation [31].
Thr Expression von S100 erkannt wurden als proinflammatorische Zellen an Stellen der Darmentzündung Phagozyten [32, 33]. Die systemische Autoimmunerkrankungen (Dermatomyositis, systemischer Lupus erythematodes, Kawasaki-Krankheit etc.) haben klare Assoziation mit S100-Expression in Makrophagen infiltraton mit Degeneration des Gewebes [34, 35].
Fazit
Untersuchungen an BCL2 Marker in Gingivazellen während parodontalen Entzündung wir Vorschlag, Geweben Parodontiums, kontinuierlich zu bakteriellen Infektionen ausgesetzt können Zellen mit einem hohen Maß an Myeloperoxidase Ergebnisse, dass DNA-Schäden durch Produkt der Katalyse enthalten. die höchste s100 Aktivität
wurden an Standorten mit einer chronischen Entzündung gefunden. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass niedrige s100 Ausdruck kann eine wichtige Rolle in der Aktivität von Riesenzellen in Riesenzelle epulis spielen. Das gilt als die wichtigsten Faktoren für die Prognose in Riesenzellgranulom zu sein. Als Ergebnis unserer Forschung haben wir ein Diagramm Abb. 3. Bild 3 S100, BCL2 und myeloperoxid Protein-Interaktion während der parodontalen Entzündung
Erklärungen
Acknowledgments
Die Autoren Open Access möchte das Labor für Immunologie an der Sumy State University zu danken.
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Wettbewerb. Interessen
die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben.
Beiträge der Autoren
PCCF waren für das Studiendesign verantwortlich. SCT analysiert und interpretiert die Daten. MTX schrieb den Bericht. BFPP hat die Arbeit im Labor. RM, half das Manuskript zu entwerfen. Alle Autoren lesen, kommentiert und genehmigt den abschließenden Artikel.
