Zusammenfassung
Hintergrund
Streptococcus mutans
(S. mutans
) ist die primäre Erreger von Karies. Sortase ist eine Transpeptidase, die mehrere Oberflächenproteine an die S. mutans
Zellwand verankert und wurde eine wichtige Rolle in Kariogenizität spielen gezeigt. Der Zweck dieser Studie war es, die genetischen Polymorphismen des Sortase Gens (Srta
) und die sozialen Verhaltensfaktoren, die mit Karies bei Kindern mit S. mutans
assoziiert zu erkunden.
Methoden in diesem
Fall-Kontroll-Studie, 121 S. mutans
Stämme wurden getrennt von kariesfreien Kinder ausgewählt und hohem Schweregrad Karies Kinder für die Sequenzierung des Srta
Gens. Sozial- und Verhaltensdaten wurden von selbstverwalteten Fragebögen gesammelt. Genomische DNA wurde aus S. mutans
Stämme und amplifiziert durch PCR extrahierte Srta
Gen zu erhalten. Die gereinigten PCR-Produkte wurden auf Mutationen mit ABI Variant Reporter Software sequenziert und analysiert. Die Verteilung der Missense-Mutationen und die Mittel der sozialen Verhaltensfaktoren wurden zwischen den Gruppen verglichen. Ein mehrere Modell logistische Regression wurde verwendet, um Störfaktoren zu steuern.
Ergebnisse | Die Mutation Frequenzen an Loci 168 (P
= 0,023) und 470 (P
= 0,032) waren signifikant unterschiedlich zwischen den Gruppen . Die besten passende Modell zeigte, dass höhere Alter, hohe Frequenzen von festen Zuckerverbrauch, längere Stillzeit, einen hohen Anteil an sichtbaren Plakette und S. mutans
mit einem T an Stelle 168 des Srta
Gens mit verbunden waren Hoch Schwere Karies bei Kindern (P
& lt; 0,05). Kinder, die einen G an Stelle 168 von S. mutans trägt
ein vermindertes Risiko für Hoch Schwere Karies hatten (OR = 0,32, 95% CI = 0,12-0,86) im Vergleich zu denen Durchführung eines T.
Schlussfolgerungen
die vorliegende Studie schlug vor, dass der Ort 168 Missense Mutation des Srta
Gen mit Kariesanfälligkeit bei Kindern mit S. mutans
korrelieren. Zusätzlich Alter, Dauer des Stillens, festen Zuckerkonsum und schlechte Mundhygiene trugen zu dieser komplexen Krankheit.
Schlüsselwörter Caries Genpolymorphismen Srta
gleich
Streptococcus mutans Li Xia Yu und Ye Tao beigetragen zu dieser Arbeit. ist
Hintergrund
Zahnkaries die lokalisierte Zerstörung von Zahnhartsubstanz durch saure Nebenprodukte aus der bakterielle Fermentation von Nahrungs Kohlenhydraten [1]. Oral Mikroorganismen, Ernährungsgewohnheiten und Host-Anfälligkeit in Wechselwirkung treten bei der Initiierung und Entwicklung von Zahnkaries [2]. Im allgemeinen soziodemographischen Variablen, Entwicklungseigenschaften, allgemeine Erziehung, Mundgesundheitsverhalten, der Mundhygiene im Zusammenhang und Bakterien sind für die Entwicklung von Karies bei Kindern Risikofaktoren bekannt [3]. Es ist eine gemeinsame Krankheit weltweit die Gesundheit von Kindern und Wohlbefinden [2,4,5], vor allem in China zu beeinflussen. Die dritte nationale Oral Health Survey in China hat gezeigt, dass die Prävalenz von kindlicher Karies in der 5-jährigen Altersgruppe so hoch wie 66% war und dass die mittlere Anzahl der zerstörten, fehlende und gefüllte Zähne (dmft) betrug 3,5 [6] .
Streptococcus mutans
(S. mutans
) der primäre Erreger von Karies ist [7]. Obwohl der Zusammenhang zwischen S. mutans
und Karies scheint überzeugend,
einige Kinder mit S. mutans nicht die Krankheit manifestieren, was darauf hindeutet, dass S. mutans
in seiner Fähigkeit, Karies zu initiieren kann variieren. Ein wichtiges Merkmal von S. mutans
bei der Entwicklung von Zahnkaries ist seine Fähigkeit, an der Zahnoberfläche zu haften. Pac ist eine der Zellwand verankerten Oberflächenproteine in S. mutans identifiziert
, und es ist verantwortlich für die Einhaltung von S. mutans
auf Zahnoberflächen zu vermitteln [8]. Sortase A (SrtA), codiert durch das Gen Srta
wurde eine Membran-lokalisierten transpeptidase gezeigt zu sein, das kovalent Protein Pac mit einem Sortiersignal an die Zellwand verbindet und besitzt wichtige anhaftenden Funktionen, die mit Kariogenizität in Verbindung gebracht wurden [ ,,,0],9,10]. S. mutans
mit einem mutierten Srta
Gen in einer deutlichen Verringerung der Adhäsion von S. mutans Potential
und die Häufigkeit von Zahnkaries [11] Ergebnis gezeigt. Da eine wichtige Funktion der Srta
das Anhaften von S. mutans
an der Zahnoberfläche ist die Hypothese aufgestellt, dass die Srta
Gen von S. mutans
könnte auf verschiedene Karies Bedingungen im Zusammenhang mit genetischen Polymorphismen besitzen.
die komplexe Ätiologie von Zahnkaries In Anbetracht der Virulenz und Kolonisation von S. mutans
kann durch Verhaltens-, soziale und ökologische Faktoren moduliert werden [12,13]. In dieser Studie wollten wir
die genetischen Polymorphismen des Srta
Gens und die sozialen Verhaltensfaktoren im Zusammenhang mit Karies bei Kindern mit S. mutans zu erkunden.
Methods
Berechnung der Studienstichprobengröße
Eine Fall-Kontrollgruppendesign wurde in dieser Studie angewendet. Laut der Studie Design, die verwendeten Formeln, um die Sequenzierungsprobenkapazitäten werden unten gezeigt [14]
Formel 1 zu berechnen:. \\ (N = \\ frac {N ^ {\\ hbox { '}}} {4} {\\ links (1 + \\ sqrt {1 + \\ frac {4} {N ^ {\\ hbox { '}} \\ delta}} \\ right)} ^ 2 \\)
Formel 2: \\ ( {N}^{\\hbox{'}}=\\frac{{\\left[{Z}_{\\alpha}\\sqrt{\\left(1+1/C\
ight){\\pi}_c\\left(1-{\\pi}_c\
ight)}+{Z}_{\\beta}\\sqrt{\\pi_2\\left(1-{\\pi}_2\
ight)+{\\pi}_1\\left(1-{\\pi}_1\
ight)/C}\
ight]}^2}{{\\left({\\pi}_2-{\\pi}_1\
ight)}^2} \\)
Formel 3: \\ ({\\ pi} _c = \\ frac {\\ pi_2 + {\\ pi} _1} {2} \\)
Formel 4: δ
= | π
- π
2 |
Die Zahl der Kinder wurde gleich in den Fall und Kontrollgruppen zu sein. Somit betrug der Wert von C
1,0. Der Wert von α wurde bei 0,05, und der Wert von β eingestellt wurde auf 0,15 eingestellt. Die Werte von π
1 und π
2 bezeichnet die Missense-Mutation vorhergesagt Raten von Srta
in den Steuer- und Fallgruppen in der vorliegenden Studie sind. Basierend auf den Raten der einzelnen Locus Missense-Mutation in der kariesfreien und Karies-aktiven Gruppen unserer früheren Arbeit [15] wurde die größte Probengröße erforderlich ist, wenn π
1 = 0,6 und π
< sub> 2 = 0,4, respectively. Es wurde daher berechnet, dass die Probengröße 121 Kinder für jede Gruppe sein sollte. Alle statistischen Tests wurden zweiseitig.
Da diese Studie in erster Linie richtet Verbindungen zwischen Missense-Mutationen von Srta
und der Schwere der Karies bei Kindern zu erforschen mit S. mutans
, nur die Kinder, die durch S. mutans
analysiert. Um die erforderliche Stichprobengröße gerecht zu werden, haben wir die Zahl der Kinder berechnet, die für die epidemiologische Untersuchung erforderlich war. Die Prävalenzrate von Karies (68%) und nicht-Karies (32%) bei kleinen Kindern [16], zusammen mit der Prävalenz von S. mutans
in der kariesfreien Gruppe (37,5%) und der karies aktive Gruppe (75%), wurden als [17]. Die Mindestzahl der Kinder wurde daher zu untersuchen erforderlich berechnet 1.009 sein.
Felduntersuchung
Eine epidemiologische Studie wurde in Huadu District, Guangzhou in Süd-China von Oktober 2012 bis Juni 2013. Das Studienprotokoll durchgeführt wurde genehmigt durch die Ethikkommission der Guanghua School of Stomatologie, Sun Yat-sen-Universität (ERC- [2012] -13). Der Huadu District ist ein neuer Stadtteil, der von vier Straßen und sechs Städten besteht. Es gab 114 Kindergärten in diesem Bezirk. Eine zufällige Cluster Sampling-Technik wurde eingesetzt, 19 Schulen zu wählen nach der Anzahl der Kinder, die wir rekrutieren benötigt. Nur die Kinder, die 36 bis 47 Monate alt waren im Alter, im Bezirk für mehr als sechs Monate gelebt hatte, berichtete keine systematische Krankheit, und berichtet, keine Antibiotika-Einnahme für mindestens die vorangegangenen 1 Monat wurden in die Studie aufgenommen. Alle teilnehmenden Schulen wurden informiert und an der Studie zugestimmt. Nach schriftlicher Zustimmung der Eltern erhalten, alle in Frage kommenden 3-jährige Kinder in den teilnehmenden Schulen wurden in die Studie aufgenommen.
Caries Entwicklung, Schmelzhypoplasie und sichtbare Plaque-Akkumulation wurden von einem einzigen Zahnarzt (L.X. Yu) bestimmt. CPI-Sonden, Einweg-Mundspiegel und intraorale LED-Lichtquellen wurden für die Untersuchungen eingesetzt. Der Zustand der Zahnkaries, wurde gemäß der Weltgesundheitsorganisation Kriterien aufgezeichnet mit dmft Indizes [18]. Kurz gesagt, wurde das Vorhandensein von Zahnkaries aufgezeichnet, wenn es eine offensichtliche Läsion in einer Grube oder Fissur oder auf glatten Oberfläche eines Zahnes war. Eine nachweisbare erweicht Wand oder unterminiert Schmelz wurde auch als Karies aufgezeichnet. Schmelzhypoplasie wurde unter Verwendung der empfohlenen Kriterien von der Fédération Dentaire Internationale (FDI) für allgemeine epidemiologische Studien aufgenommen [19]. Schmelzhypoplasie enthalten drei Arten von Fehlern: Gruben, Rillen oder fehlende Schmelz. mit dem Visible Plaque Index (VPI) beurteilt [20] wurde die Mundhygiene. Vier Stellen von distal, midmost und mesialen bukkalen Oberflächen und der midmost der lingualen Oberfläche jedes Zahns wurde untersucht die VPI aufzuzeichnen. Der Prozentsatz der untersuchten Stellen mit Plaque sichtbar wurde berechnet. Etwa 10% der Probanden wurden erneut untersucht die intra-Prüfer Zuverlässigkeit zu beurteilen. Die gepoolten Proben von Zahnbelag von jedem Kind wurden mit einem sterilen Wattestäbchen von den Bukkalflächen der Oberkieferzähne gesammelt. Die Proben wurden in einer sterilen Flüssigkeit thioglycolate (FT) Medium und in das Labor auf Eis innerhalb von 4 h Sammlung dispergiert.
Die Daten wurden gesammelt, um einen selbst auszufüllenden Fragebogen verwenden, die an die Betreuungspersonen verabreicht wurde. Der Fragebogen bestand aus vier Teilen: soziodemographischen Merkmale (zB Alter und Geschlecht der Kinder, Beruf und Bildungsniveau der Eltern), Entwicklungseigenschaften (zB Schwangerschaftsalter, Art der Lieferung, das Gewicht bei der Geburt und Schmelzhypoplasie), allgemeine Erziehung Geschichte (zB Flasche füttern Erfahrung und Dauer des Stillens) und Mundgesundheitsverhalten (zB feste Zuckerverbrauch, die Häufigkeit der Zähneputzen und die Verwendung von Zahnpasta).
Isolierung von S. mutans
Plaque-Proben wurden gemischt und für 30 s beschallt und wurden verteilt, um eine Verdünnungsreihe bis 10 -3 Verdünnungen zu erhalten. Für jede Probe wurden 50 ul des Verdünnungsmittels wurde auf Mitis-salivarius-Bacitracin (MSB) Agar plattiert, ergänzt mit 20% Sucrose und 0,2 Einheiten /ml Bacitracin und anaerob (85% N 2, 5% CO 2 und 10% H 2) bei 37 ° C für 3 d [21]. Wir wählten zufällig zwei Kolonien von jedem Kind nach der Koloniemorphologie und getestet, um die Kolonien für ihre Fähigkeit, Mannit zu gären, Sorbit, Raffinose, Melibiose und Aesculin und für ihre Fähigkeit, Arginin [22] zu hydrolysieren. Die identifizierten Bakterienstämme wurden anschließend auf MSB-Agar ausgestrichen und in 50% Glycerin bei -80 ° C vor dem Gebrauch aufbewahrt.
Definition der Fall und Kontrollgruppen
die genetischen Polymorphismen im Srta
Gen zu erforschen und zu vergleichen von S. mutans
, Kinder mit unterschiedlichen Karies Erfahrungen wurden berücksichtigt. Insgesamt 121 kariesfreien Kinder mit S. mutans
zufällig als kariesfreien Gruppe ausgewählt wurden, und 121 Kinder mit dmft ≥6, die S. waren mutans- positiv
wurden ausgewählt, um die High-Schwere zu bilden Karies-Gruppe. Die dmft Score der Gruppe hohem Schweregrad war in Übereinstimmung mit der Kategorie in einer früheren Studie verwendet [23].
Extraktion der chromosomalen DNA
S. mutans
Stämme wurden in 2 ml Hirn-Herz gewachsen und Infusionsbrühe bei 37 ° C unter anaeroben Bedingungen 18 Stunden inkubiert. Zellen aus den BHI Kulturen zentrifugiert wurden in 5% Chelex100, behandelt mit 10 & mgr; l von 20 mg /ml Proteinase K bei 37 ° C für 1 min, suspendiert und dann bei 56 ° C für 1 h, gefolgt von Kochen für 10 min verdaut. Die Röhrchen wurden für 3 min auf Eis eingefroren, und die Suspension wurde für 10 min bei 12.000 rpm zentrifugiert. Der Überstand wurde für die PCR gewonnen. Die Qualität und Quantität der DNA-Proben wurden mit einem UV-Spektrophotometer bei 260 nm und 280 nm gemessen. Alle DNA wurde bei -20 ° C vor der weiteren Analyse.
Amplifikation und Sequenzierung des Srta
Gen
Die PCR-Primer entworfen von ABI Primer Designer V3.0 gespeichert, die die UA159 Srta zu verstärken verwendet wurden
Gen in Tabelle 1 A 1035 bp DNA-Fragment wurde die Srta
Gen trägt, aufgeführt sind, von S. mutans
Stämme verstärkt. Durch die Begrenzung der Länge der Sequenzierung liest, wir das Gen in drei Fragmente amplifiziert und sequenziert, die für die Detektion des Srta Gens in S. mutans
Primer
verwendet Überlappungs sections.Table 1 PCR-Primern enthaltenen Sequenz (5'-3 ')
Produktgröße (bp)
Pair1-F
GACGTTTGGCAACTGGTGTG
557
Pair1-R
CCAAGCAATTAGGGCATTTC
Pair2-F
CAATGAAAAAAGAACGTCAATCTA
448
Pair2-R
TGTGAAGATCCGGTCATACCA
Pair3-F
CGGAATTGCCATTCCAGACT
721
Pair3-R
TCCGAAACTATCAAAGCAACAT
Die PCR-Reaktion wurde in einem 25 ul Reaktionsvolumen durchgeführt. Die Komponenten in der PCR-Reaktion (Endkonz.) Wurden mit 2,5 & mgr; l 10 × PCR Puffer, 0,2 mM dNTP-Mischung, 1,5 mM MgCl 2, 0,2 uM von jedem Primer, 100-400 ng der genomischen DNA als Matrize, und 2U Platinum® Taq DNA Polymerase (Invitrogen, CA, USA). Der temperierte wurde bei 95 ° C 5 min vorgewärmt. Der PCR-Zyklus war wie folgt: Denaturierung bei 95 ° C für 30 s, Annealing bei 60 ° C für 30 s und Verlängerung bei 72 ° C für 50 s. Insgesamt 50 Zyklen wurden durchgeführt für 5 min bei 72 ° C mit einem abschließenden Verlängerungsschritt. Fünf Mikroliter von jeder amplifizierten Produkte wurde durch Elektrophorese auf einem 1,5% Agarosegel analysiert. Die PCR-Produkte wurden gereinigt eines QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Hilden, Deutschland). Letztlich wurden die Produkte von der Shanghai Life Technologies Biotechnologie-Unternehmen (Life Technologies, Shanghai, China) sequenziert. Variant Reporter Software wurde verwendet, um die Sequenzdaten zu analysieren und die Srta
Sequenz von S. mutans
UA159 wurde als Referenzsequenz ausgewählt.
Statistische Analyse
Datenanalyse in der SPSS mit erfolgte 16.0 Software. Kategorische und kontinuierlichen Variablen wurden verglichen, um einen Chi-Quadrat-Test und eine unabhängige Proben t
Test sind. Bivariate und multivariate logistische Analysen wurden verwendet, um Odds Ratios (OR) mit ihren entsprechenden 95% Konfidenzintervall (CI) und identifizieren die Faktoren, die mit hohem Schweregrad Karies zu berechnen. Karies-Status wurde als abhängige Variable (0 = kariesfreien Gruppe, 1 = Hoch Schwere Kariesgruppe) behandelt. Unabhängige Variablen waren jene Faktoren, die Karies Status beeinflusst haben könnte. Diese unabhängigen Variablen mit P
& lt; 0,2, bezogen auf eine bivariate logistischen Analyse wurden weiter in einem mehrere logistische Regressionsmodell getestet. AP
Wert. & Lt; 0,05 für alle zweiseitigen statistischen Tests wurde als signifikant betrachtet
Ergebnisse | Die statistische Analyse der sozio-ökonomischen demographischen Charakteristika und Entwicklungsfaktoren sind in Tabelle 2 In sozialen Indikatoren gezeigt, fanden wir deutlich unterschiedliche Verteilungen in dem Alter (in Monaten) zwischen den Gruppen (P
& lt; 0,001). Zu den Variablen Kindermundgesundheitsverhalten (Tabelle 3) darstellt, die Dauer des Stillens (P
= 0,09), die Häufigkeit der festen Zuckerverbrauch (P
& lt; 0,01) und der Anteil der VPI (P
& lt; 0,01) waren alle signifikant mit Karies risk.Table 2 Bivariate Analyse der demografischen, sozioökonomische und Entwicklungseigenschaften in Bezug auf Karies Status verbunden
Variablen
Controls (n = 121)
Fälle (n = 121)
x 2
P-Wert *
COR (95% CI)
P-Wert
n (%)
n (%)
Teil1 Demographische und sozioökonomische Merkmale
Sex
1.345
0.246
Männer †
59
(48,8)
69
(57,0)
Frauen
62
(51,2)
52
(43,0)
0,72 (0,43-1,19)
0.198
Mutter Schul
1,369
0.242
≥12 Jahre †
74
(61,2)
65
(53,7)
& lt; 12 Jahre
47
(38,8)
56
(46,3)
0,74 (0,44-1,23)
0.242
Vaters Schule
3,615
0.057
≥12 Jahre †
87
(71,9) auf
73
(60,3)
& lt; 12 Jahre
34
(28.1)
48
(39,7)
0,59 (0,35-1,02 )
0.058
Beruf der Mutter
1,813
0.404
0.413
Employer/Professional †
8
(6.6)
14
(11.6)
Employee/Non professionellen
88
(72,7)
84
(69.4)
0.55(0.22-1.37)
0.196
Unemployed
25
(20.7)
23
(19.0)
0,53 (0,19-1,48)
0.224
Beruf des Vaters
3,503
0.173
0.181
Employer/Professional †
22
(18.2)
29
(24.0)
Employee/Non professionellen
92
(76.0) auf
90
(74,4)
0.74(0.40-1.39)
0.350
Unemployed
7
(5.8)
2
(1.7)
0,22 (0,04-1,15)
0.072
Mittelwert (SD)
Mittelwert (SD)
t
Test
Alter (Monate)
41.6
(2.9)
43.4
(3.6)
−4.285
<0.001**
1.18(1.09-1.28)
<0.001
Alter der Mutter bei Geburt des Kindes
27.1
(3.8)
26.4
(3.8)
1.517
0.131**
0.95(0.89-1.02)
0.132
Teil 2 Entwicklung Merkmale
Gestationsalter
0.066
0.797
≥37 Wochen †
58
(47,9)
60
(49,6)
& lt; 37 Wochen
63
(52,1
) 61
(50,4)
0,94 (0,57-1,55)
0.797
0.281
0.596
vaginale Geburt †
73
(60,3)
77
(63,6)
Caesarean Geburt
48
(39,7)
44
(36,4)
0,87 (0,52 -1,46)
0.596
Gewicht bei der Geburt
2,381
0,123
≥2500 g †
118
(97,5)
113
(93,4)
& lt; 2500 g
3
(2.5)
8
(6.6)
2,79 (0,72-10,76)
0.138
Schmelzhypoplasie
- - Wooel.com
No †
121
(100,0 )
120
(99,2)
Ja
0
(0.0)
1
(0,8)
-
-
* Chi-Quadrat-Test, ** Unabhängige Proben t
Test.
COR (Roh-Odds Ratio), CI (Konfidenzintervall), † Referenzkategorie.
Tabelle 3 Bivariate Analyse der allgemeinen Erziehung und Mundgesundheitsverhalten in Bezug auf Karies Status
Variablen
Controls (n = 121)
Fälle (n = 121)
x 2
P-Wert *
COR (95% CI)
P-Wert
n (%)
n (%)
Teil 1 Allgemeine Erziehung zwischen 0-3 Jahre
Flaschenfuettern Erfahrung
0.764
0.382
Ja †
22
(18.2)
17
(14.0 )
No
99
(81,8)
104
(86.0)
1,36 (0,68-2,71)
0.383
Dauer des Stillens
9,382
0,009
0,012
nie gestillt †
22
(18.2)
9
(7.4)
& lt; 1 Jahr
84
(69,4) auf
84
(69,4)
2,44 (1,06-5,62)
0,035
≥1 Jahr
15
(12.4)
28
(23.1)
4,56 (1,68-12,37)
0,003
Teil 2 Oral Gesundheitsverhalten im Alter von 3
Fest Zuckerverbrauch
19,492
& lt; 0,001
& lt; 1 Mal pro Tag †
86
(71.1)
52
(43,0)
≥1 Mal pro Tag
35
(28,9)
69
(57,0)
3,26 (1,91-5,56)
& lt; 0,001
Häufigkeit des Zähneputzens
0,154
0.695
≥1 Zeit pro Tag †
73
(60,3)
70
(57.9)
& lt; 1 Mal pro Tag
48
(39,7
) 51
(42,1)
1,11 (0,66-1,85)
0.695
Verwendung von Zahnpasta
0.000
1.000
1.000
Immer †
70
(57,9)
70
(57,9)
Manchmal
29
(24.0)
29
(24.0)
1.00(0.54-1.84)
1.000
Never
22
(18.2)
22
(18.2)
1,00 (0,51-1,97)
1.000
Mittelwert (SD)
Mittelwert (SD)
t
Test
Visible Plaque-Index (%)
46.2
(20.9)
75.7
(15.8)
−12.386
<0.001**
1.08(1.06-1.10)
<0.001
* Chi-Quadrat-Test, ** Unabhängige Proben t
Test.
COR (Roh-Odds Ratio), CI (Konfidenzintervall), † Referenzkategorie.
Die Srta
Sequenzen der klinischen Im Vergleich Stämme mit S. mutans
UA159, insgesamt 38 Einzel-Nukleotid-Substitutionen wurden, darunter 21 stille Mutationsstellen gefunden und 17 Missense Mutationsstellen (Abbildung 1). Die kariesfreien Gruppe wurde festgestellt, 19 stille Mutationsstellen Standorte und 11 Missense-Mutation zu haben, während die Hoch Schwere Karies Gruppe haben 20 stille Mutationsstellen und 14 Missense Mutationsstellen gefunden wurde. Nur zehn Stämme waren identisch UA159 zu belasten; Davon waren fünf von der kariesfreien Gruppe, und fünf waren von der Karies Gruppe hohem Schweregrad. Keiner der Srta
Gene in den Sequenzen hatten eine Basis Einfügen oder Löschen. Abbildung 1 Punktmutationen in klinischen Isolaten. Detaillierte Legende: Die Nr 306 klinischen Isolat (Karies-freie Gruppe) hat Mutationen weisen bei 78, 99, 112, 114, 165, 168, 176, 222, 249, 312 und 671 Locus Basen. Die Nr 139 klinischen Isolat (Hoch Schwere Karies Gruppe) hatte eine Punktmutation bei 78, 150, 165, 168, 176, 671 Locus Basen.
Silent-Mutationsstellen in den klinischen Stämmen an den Positionen identifiziert wurden 48, 78, 85, 99, 138, 150, 162, 165, 183, 186, 222, 237, 249, 261, 312, 357, 582, 615, 636, 669 und 717.
Missense Mutationsstellen in den klinischen Stämmen waren an Positionen identifiziert, 23, 34, 36, 47, 100, 112, 114, 168, 176, 256, 298, 382, 470, 548, 584, 671 und 706. Die Aminosäuretransversionen infolge Missense-Mutationen sind in der Tabelle angezeigt, 4. Hier zeigen wir nur die Veränderungen der Aminosäuren aufgrund Missense-Mutationen, da diese Änderungen die Aktivität von Sortase A.Table 4 Transversion von Aminosäuren aufgrund Missense-Mutationen nach Codons
Basis Website
UA159
Clinal Stämme
Codon
Aminosäure
Codon
Aminosäure
23
AGG
Arginine
AAG
Lysine
34
AGT
Serine
GGC/GGT
Glycine
36
AGT
Serine
GGC/GGT
Glycine
47
ACC
Threonine
ATC
Isoleucine
100
CCA
Proline
TCA
Serine
112
GCC
Alanine
ACC/ACT
Threonine
114
GCC
Alanine
ACT
Threonine
168
GAT
Asparaginic Säure
GAG
Glutamin- acid
176
CAC
Histidine
CGC
Arginine
256
GCT
Alanine
TCT
Serine
298
GAC
Asparaginic acid
AAC
Asparagine
382
GTC
Valine
ATC
Isoleucine
470
CGT
Arginine
CAT
Histidine
548
GTC
Valine
GCC
Alanine
584
CCG
Proline
CTG
Leucine
671
AAT
Asparagine
ACT
Threonine
706
GCT
Alanine
ACT
Threonine
Die Verteilungsfrequenzen der Missense-Mutationsstellen sind in Tabelle 5. Es gab einen signifikanten Unterschied in der Mutationshäufigkeit im locus 168 (P
= 0,023); die Häufigkeit von Mutationen an dieser Stelle war signifikant höher in der kariesfreien Gruppe als in der Hoch Schwere Karies Gruppe. Außerdem Stämme mit dem Locus 470 Polymorphismus eine signifikant höhere Rate in der Hoch Schwere Karies-Gruppe im Vergleich mit der kariesfreien Gruppe (P
= 0,032) zeigte .Tabelle 5 Bivariate Analyse der Missense-Mutationsraten in Bezug auf Status Karies
Missense Mutation
Controls (n = 121)
Fälle (n = 121)
x 2
P-Wert *
COR (95% CI)
P-Wert
n (%)
n (%)
23 G → A †
5
(4.1)
12
(9.9)
3.100
0.078
2.55(0.87-7.49)
0.087
34 A → G
7
(5.8)
10
(8.3)
0.569
0.450
0.68(0.25-1.85)
0.453
36 T → C
6
(5.0)
11
(9.1)
1.582
0.209
1.92(0.69-5.36)
0.215
47 C → T
8
(6.6)
11
(9.1)
0.514
0.473
1.41(0.55-3.64)
0.475
100 C → T
0
(0.0)
1
(0.8)
—
1.000**
—
1.000
112 G → A
71
(58.7)
71
(58.7)
0.000
1.000
1.00(0.60-1.67)
1.000
114 C → T
65
(53.7)
56
(46.3)
1.339
0.247
0.74(0.45-1.23)
0.248
168 T → G
26
(21.5)
13
(10.7)
5.166
0.023
0.44(0.21-0.90)
0.025
176 A → G
63
(52.1)
68
(56.2)
0.416
0.519
1.18(0.71-1.96)
0.519
256 G → T
1
(0.8)
0
(0.0)
—
1.000**
—
1.000
298 G → A
1
(0.8)
0
(0.0)
—
1.000**
—
1.000
382 G → A
1
(0.8)
0
(0.0)
—
1.000**
—
1.000
470 G → A
7
(5.8)
17
(14.0)
4.625
0.032
2.66(1.06-6.68)
0.037
548 T → C
0
(0.0)
1
(0.8)
—
1.000**
—
1.000
584 C → T
0
(0.0)
1
(0.8)
—
1.000**
—
1.000
671 A → C
115
(95.0)
116
(95.9)
0.095
0.758
0.83(0.25-2.78)
0.758
706 G → A
0
(0.0)
1
(0.8)
—
1.000**
—
1.000
* Chi-Quadrat-Test. ** Fisher-Test.
† G → A, G für die 23-Locus Basis in UA159, A, um die 23-Locus Basis in den klinischen Stämmen darstellt.
COR (Roh-Odds Ratio), CI (Konfidenzintervall).
zur Steuerung der Störfaktoren, multiple logistische Regressionsanalysen wurden durchgeführt, und die Ergebnisse (Tabelle 6) zeigten, dass höhere Alter (P
= 0,027), hohe Frequenzen von festen Zuckerverbrauch (P
& lt; 0,001 ), verlängert Stillen (P
= 0,028), ein hoher Anteil an sichtbarem Plaque (P
& lt; 0,001) und S. mutans
Stämme mit einem T an locus 168 des Srta
Gens (P
= 0,023) assoziiert waren signifikant mit hohem Schweregrad Karies bei Kindern. Ein geringeres Risiko von hohem Schweregrad Karies (AOR = 0,32, 95% CI = 0,12-0,86) wurde bei Kindern, die am Ort 168 des Srta
Gen im Vergleich S. mutans
Stämme mit einem G getragen ein T. Doch nach der Störfaktoren zu steuern, wurde die Mutation an Locus 470 aus der Zusammenfassung der multiplen logistischen Regressionsergebnisse
Variablen
B ‡
SE model.Table 6 ausgeschlossen
P
AOR
95% CI für AOR
Lower
Ober
Mutationen an Ort 168
No †
Yes
−1.156
0.510
0.023
0.32
0.12
0.86
Duration des Stillens
0,028
nie gestillten †
& lt; 1 Jahr
1,273
0.651
0.050
3,57
1,00
12.79
≥1 Jahr
2,058
0.772
0,008
7,83
1,73
35.54
festen Zuckerverbrauch
< (months)
0.131
0.059
0.027
1.14
1.02
1.28
Visible (%)
0.090
0.012
<0.001
1.09
1.07
1.12
Constant
−16.110
3.263
<0.001
0.00
