Zusammenfassung
Hintergrund
Während eines Forschungsprojekts zur Pilz Candida
Spezies bei Patienten Obturator mit einer Strahlentherapie behandelt tragen für ihre rezidivierenden Nasopharynxkarzinom, die wir beobachtet serendipitously das Vorhandensein von schwarzen Pilz in zwei aufeinander folgenden Proben von einem Patienten.
Fall Präsentation
die Proben von einem 57 Jahre alten Hong Kong Herr gesammelt wurden, die undifferenzierte Art des Nasen-Rachen-Karzinom diagnostiziert . Er wurde mit endgültiger gleichzeitige Radiochemotherapie gefolgt von einer adjuvanten Chemotherapie behandelt und erhielt dann einen zweiten Gang Strahlentherapie mit IMRT. 18S rDNA-Sequenzierung ergab, dass die Isolate zu Exophiala dermatitidis
gehören, die zu Fluconazol, Itraconazol, Ketoconazol und Voriconazol anfällig war. Interessanterweise dermatitidis E.
Isolate Caspofungin resistent waren und ein Isolat war resistent gegenüber Amphotericin B. Beide Isolate Biofilmen vergleichbar mit der von Candida albicans
gebildet. Einzel-Isolat von E. dermatitidis
zeigte Hämolysin und Proteinase Fähigkeit vergleichbar mit C. albicans
während das andere Isolat nicht.
Fazit kaufen Wir, zum ersten Mal, berichtete die Entdeckung eines schwarzen Pilz -E. dermatitidis
Isolate von einem Patienten abgeleitet mit Nasen-Rachen mit einer Strahlentherapie behandelt Karzinom. Diese Isolate wurden gezeigt Caspofungin resistent sein, ein Haupt antimykotische Mittel für die systemische Candidiasis. Wie wenig über den schwarzen Pilz in der klinischen Einstellung bekannt ist, ist es wichtig, dass Ärzte auf der Höhe der neuen Entdeckung in diesem Gebiet.
Schlüsselwörter Black Fungus antimykotische Empfindlichkeits Biofilm Virulenz Chaminda Jayampath Seneviratne, Phoenix HL Fong halten müssen und Victor HF Lee trugen gleichermaßen zu dieser Arbeit.
Hintergrund
Oral Pilzinfektionen bei normalen gesunden Menschen nicht üblich sind. Jedoch können opportunistische Mykosen in immunsupprimierten Individuen auftreten, zum Beispiel Patienten mit einer HIV-Infektion und AIDS und Krebspatienten unter Chemotherapie und /oder Strahlentherapie [1,2]. Die Inzidenz von Nasopharynxkarzinom (NPC) ist selten in den meisten Teilen der Welt, aber es ist endemisch unter Asien, vor allem in Süd-China, einschließlich Hong Kong [3]. Strahlentherapie wurde die Standard-Behandlung für Frühphasen-NPC während der Strahlentherapie in Kombination mit Chemotherapie bei lokal reserviert und regional fortgeschrittenem nicht-metastatischen Erkrankungen [4]. Der Hauptmundgesundheit Widersacher NPC-Patienten ist die Strahlungswirkung auf Speicheldrüsen, was zu einer Speichel Dysfunktion, Xerostomie und orale Mukositis, die eine bedeutende Rolle in der Mundhöhle Infektion gespielt und dazu beigetragen, Candida
Infektion [5,6]. Wesentliche Teile der Parotis und der Mundhöhle leiden zwangsläufig von hohen Strahlendosis, die unmittelbare Nähe dieser Strukturen auf den Tumor zurückzuführen ist. Es wurde berichtet, dass 50 bis 80% der Patienten Xerostomie während der intensitätsmodulierten Strahlentherapie (IMRT), bis zu fast 100% bei gleichzeitiger Chemotherapie gegeben wird [5] entwickelt. Saliva spielt eine wichtige Rolle bei der oralen Homöostase, um die Gesundheit der Mundhöhle zu modulieren. Speichel- Immunglobuline sind wichtig für die mündliche Verteidigung, die Schleimhautgewebe von mikrobiellen Infektionen zu schützen [7]. Daher sind diese Patienten besonders anfällig für orale Pilzinfektionen. Candida und Aspergillus
Was sind die beiden wichtigsten opportunistische Pilzarten [1]. Fungal durch andere Arten verursacht Krankheiten wie Coccidiodes
, Histoplasma
sind außerordentlich selten.
Exophiala dermatitidis
ist ein Element, das dem Pilz Auftrag gehört Chaetothyriales, die bei der Infektion gesund und Personen mit geschwächtem Immunsystem verursachen können [ ,,,0],8]. Chaetothyriales sind die wichtigsten Erreger der menschlichen Phäohyphomykose und andere Arten von klinischen Mustern wie Chromoblastomykose [8,9]. E. dermatitidis
weltweit in Menschen verursachten Umwelt gefunden wurden, beispielsweise die Badeanlagen in Asien und den öffentlichen türkischen Dampfbad Einrichtungen in Europa [10,11]. Es wurde oligotrophic und thermophilen bewährt und ist in der Lage in heißen und feuchten Bedingungen zu überleben, [8].
Es sollte beachtet werden, dass E. dermatitidis
als Schwellen systemische Pathogen in Südostasien angesehen wird [8]. Fatal zerebralen und schwarze Pilze Infektionen verbreitet haben in China berichtet worden, und E. dermatitidis
einer der Erreger war [12]. Zuvor E. dermatitidis
hat nie aus der Mundhöhle zu isolieren in Menschen berichtet worden. In diesem Fall melden, zwei Stämme von E. dermatitidis
von einem Verschluss eines Patienten mit NPC während IMRT isoliert. Wir führten umfassend eine molekulare Analyse der Isolate und charakterisiert ihre phänotypische Verhalten in Bezug auf die antimykotische Anfälligkeit, Hämolysin und Proteinase Produktion und Biofilmbildung.
Fall Präsentation
Fall
A 57-jährige Hong Kong Herr war haben undifferenzierte Art von Nasen-Rachen-Karzinom (NPC) (Stadium III T2N2M0 Krankheit, AJCC 7. Auflage) an der Queen Marry Hospital, Hong Kong März diagnostiziert 2008. Er mit endgültiger gleichzeitige Radiochemotherapie gefolgt von einer adjuvanten Chemotherapie abgeschlossen im September 2008 behandelt wurde, wurde er gefunden wurde in Bericht 2012 Pathologie Oktober durchgeführt zu haben, ein lokales Rezidiv von NPC in der Nasenhöhle sich nach rechts erstreckt ethmoid und Kieferhöhle im August 2012 Craniofacial Resektion und rechts Maxillektomie zeigte rezidivierenden undifferenziertes Karzinom. Eine orale Obturator wurde nach Maß die Wunde Defekt und Erleichterung des Kauens zum Auffüllen, Schlucken und orale Ernährung. In Anbetracht der positiven Resektionsrand wurde postoperative Radiochemotherapie vorgeschlagen. Er erhielt dann einen zweiten Gang Strahlentherapie mit IMRT mit 60Gy zum operativen Bett und 56Gy der hohen Risikobereich geliefert, in 30 Fraktionen über 6 Wochen durch gleichzeitige beschleunigte Strahlentherapie (SMART) Technik gleichzeitig mit 2 Zyklen einer intravenösen Chemotherapie mit Cisplatin 100 mg /m
2 alle 3 Wochen.
Materialien und Methoden
Mundspülung Proben
Dieser Patient für eine am Institut für Klinische Onkologie durchgeführte Studie wurde eingeladen, Königin heiraten Hospital, der University of Hong Kong , mit dem Ziel Hong Kong bei der Identifizierung der Wirt und Pathogen Attribute von orale Candidiasis bei Patienten mit NPC mit IMRT behandelt. Eine schriftliche Einverständniserklärung wurde von dem Patienten erhalten an der Studie teil zu nehmen. Zulassung für diese Studie in Übereinstimmung mit den Helsinki-Erklärung von lokalen Institutional Review Board der University of Hong Kong wurde vor Beginn erhalten zu studieren. Der Patient wurde gebeten, den Mund mit 10 ml phosphatgepufferter Salzlösung (pH 7,3, 0,1 M) für 1 min und expectorate in einen sterilen Behälter zu spülen. Die Proben wurden dann für die mikrobiologische Analyse auf die mündliche Biosciences Labor, Fakultät für Zahnmedizin, der University of Hong Kong übertragen. Patient wurde gebeten, zu Beginn der Studie stimulierte Speichel zu spucken vor dem Beginn der IMRT und dann bei 2, 4, 6 und 8 Wochen nach dem Beginn der IMRT. Mundspülungsproben wurden zuerst für 10 Minuten bei 13.200 rpm zentrifugiert und das Pellet wurde in sterilem PBS resuspendiert, gefolgt von 30 Sekunden Vortexen. Danach wurden die Proben auf einen Sabouraud-Dextrose-Agar ausplattiert (SDA, Gibco). Die Platten wurden 48 Stunden lang bei 37 ° C.
Speziation von der Pilzisolate
Der Pilz auf SDA subkultiviert wurde einzelne Kolonien zu erhalten, die zu Gram-Färbung dann unterworfen wurden und plattiert auf CHORMagar für Speziation. Als nächstes wurden einer Isolate zu kommerziell erhältlichen API 32C-Identifikationssystem (BioMe'rieux, Marcy l'Etoile, Frankreich).
Molekulare Identifizierung
Um eine genaue Identifizierung zu machen, wurde die DNA der schwarzen Pilz-Proben extrahiert die Verwendung von MasterPure ™ Hefe-DNA-Reinigungs-Kit (Epicentre Biotechnologies, Madison, Wisconsin, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die extrahierten DNA-Proben wurden mit fungus spezifischen universellen Primer ITS3 und ITS4 durch PCR amplifiziert. Das PCR-Amplifikationsprotokoll bestand aus 30 Zyklen Denaturierung für 1 Minute bei 94 ° C, Annealing für 1 min bei 50 ° C und Verlängerung für 2 Minuten bei 72 ° C. Amplicons wurden durch Elektrophorese auf Agarose-Gelen überprüft Anfärbung mit Ethidiumbromid. Als nächstes wurde Amplikon zu 18S rDNA-Sequenzierung bei Zentrum für Genomforschung gereinigt und unterzogen, der University of Hong Kong. unter Verwendung von Standardkriterien für eine signifikante Übereinstimmung DNA-Sequenz wurde gegen NCBI-Datenbank durchsucht.
Test antimykotische Empfindlichkeits
Die antimykotische Anfälligkeit der Isolate bewertet wurde die Disk-Diffusionstest unter Verwendung von nach dem CLSI M44-A-Richtlinie mit gewissen Modifikationen wie wir zuvor beschrieben [13,14]. Fünf im Handel erhältlichen Antipilzmittel wurden für diese Studie ausgewählt: Amphotericin B (AMPH), Caspofungin (CASP5), Fluconazol (FLUCZ), Ketoconazol (KTC), Itraconazol (ITRAC) und Voriconazol (VOR.1) (Neo-Sensitabs, Rosco Diagnostica, Taastrup, Dänemark). Suspensionen gleich McFarland 0,5 Trübung von Reinkultur hergestellt. Zwanzig & mgr; l der Suspension wurden auf Mueller-Hinton-Agar durch Spiralplattenmaschine beimpft eine gleichmäßig gestört Impfung zu erreichen. Zehn Mikrogramm Amphotericin B, 5 & mgr; g Caspofungin, 25-ug Fluconazol, 10 & mgr; g Itraconazol, Ketoconazol 15 & mgr; g und 1 & mgr; g-Voriconazol Scheiben wurden dann auf die beimpften Agar aufgetragen. Die Platten wurden für 2 Tage aerob bei 37 ° C inkubiert. Dann die Durchmesser der Wachstums Hemmzonen gemessen. Der Test wurde in Duplikaten bei zwei getrennten Gelegenheiten durchgeführt.
Biofilmbildung durch XTT-Reduktionstest ausgewertet
E. dermatitidis
Biofilmen für Pilz Biofilmen gemäß einem zuvor veröffentlichten Protokoll entwickelt wurden [15,16]. Kurz gesagt, Bouillonkultur von E. dermatitidis Videos Inokulieren einer Platinöse der Kultur in Hefe-Stickstoff-Basis (YNB, Difco) Medium, ergänzt mit 50 mM Glucose für eine Inkubation über Nacht bei 37 ° C hergestellt. Die Kultur wurde zweimal mit 20 ml phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen (PBS, pH 7,2, 0,1 M) durch Zentrifugation. Die gewaschene Kultur wurde in YNB-Medium, ergänzt mit 100 mM Glucose resuspendiert und eine Suspension gleich McFarland Trübungs 4 erhalten. Einhundert Mikroliter der Suspension wurden in jede Vertiefung einer sterilen Polystyrol-Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen zugegeben (Iwaki, Tokyo, Japan). Eine Reihe von Brunnen nur das Medium ohne Zellsuspension enthielt, wurde als Negativkontrolle hergestellt. Die Platte wurde bei 75 rpm in einem Schüttler bei 37 ° C für 1,5 Stunden inkubiert, damit die Zellen an die Bohrlochoberfläche (Adhärenz Phase) zu haften. Dann wurde die Zellsuspension in jeder Vertiefung abgesaugt und mit 100 ml PBS gewaschen, um nicht anhaftende Zellen zu entfernen. Zweihundert Mikroliter YNB-Medium mit 100 mM Glucose wurde an jede der gewaschenen Vertiefungen gegeben und die Platte wurde für 48 Stunden bei 37 ° C in einem Schüttler bei 75 Upm inkubiert.
Die Biofilmbildung durch die Verwendung eines XTT bewertet Reduktionstest [15,17]. Eine Mischung aus 40 ml XTT (Sigma, St. Louis, MO) -Lösung (1 mg /ml in PBS), 2 ml Menadion (Sigma) -Lösung (0,4 mM) und 158 ml PBS hergestellt. Nach der Wachstumsphase von 48 Stunden werden alle Zellsuspensionen wurden mit 200 ml PBS für 3 mal abgesaugt und gewaschen. Zweihundert Mikroliter PBS-XTT-Menadion Lösung wurden in jede der gewaschenen Vertiefungen gegeben und die Platte wurde für 3 Stunden bei 37 ° C in Dunkelheit inkubiert. Nach der Inkubation wurden 100 ml Lösung aus jeder Vertiefung wurde in ein neues gut übertragen und gemessen mit einem Mikrotiterplatten-Lesegerät (SPECTRAmax 340 Tunable Mikroplatten-Reader; Molecular Devices Ltd., Sunnyvale, CA) bei 490 nm
Hemolysin Test <. br> die hämolytische Aktivität wurde mit dem Blut Plattentest bestimmt, wie wir zuvor für andere Pilzarten beschrieben haben [18]. Kurz gesagt, Suspensionen mit einem Inokulum Größe von 10 8 Zellen /ml Reinkultur hergestellt. (; Merck, Darmstadt, Deutschland wt /vol) Zehn Mikroliter der Suspension wurden auf Sabouraud-Dextrose-Agar mit 3% Glucose und 7% frischem Schafblut ergänzt gesichtet. Die Platten wurden bei 37 ° C in 5% CO 2 für 48 Stunden inkubiert. Der unverwechselbare durchscheinend Halo um die Inokulum-Website zeigte positive hämolytische Aktivität, die unter Verwendung von computerisierten Bildanalysesystem (Qwin, Leica, UK) gemessen. Die Intensität der Hämolysin-Produktion durch die Pilz-Spezies durch hämolytische Index dargestellt wurde (Hallo) erhaltene Verhältnis durch den Durchmesser der Kolonie durch die Gesamtdurchmessers der Kolonie und der transluzenten Halo dividiert wird. C. albicans
ATCC 90028 und C. parapsilosis
ATCC 22019 Stämme jeweils als positive und negative Kontrolle der hämolytischen Aktivität verwendet wurden. Der Assay wurde in vierfacher Ausfertigung bei zwei getrennten Gelegenheiten durchgeführt.
Proteinase Assay
Rinderserumalbumin (BSA) Assay wurde zur Bewertung der Proteinase-Aktivität durchgeführt, wie wir früher beschrieben haben, [19]. Suspensionen gleich McFarland 2 Trübung aus Reinkultur hergestellt. Zehn Mikroliter der Suspension wurden vor Ort an BSA 1% beimpft (w /v) Agar-Platte. Die Platten wurden für 5 Tage, gefolgt aerob bei 37 ° C inkubiert, nach 15 Minuten mit Naphthalin schwarz 1,25% ige Lösung in Methanol /Wasser 90% v /v gefärbt und entfärbt für weitere 36 Stunden mit der Lösung zu verändern. Der Durchmesser der Zone der Proteolyse und der Kolonie wurden unter Verwendung von computerisierten Bildanalysesystem (Qwin, Leica, UK) gemessen. Proteinase Produktion (Pr d-Wert) wurde durch Dividieren des Durchmessers der Zone der Proteolyse und der Kolonie durch den Durchmesser der Kolonie erhalten. C. albicans
ATCC 90028 und C. parapsilosis
ATCC 22019 Stämme jeweils als positive und negative Kontrolle der Proteinase-Aktivität verwendet wurden. Der Test in vierfacher Ausfertigung bei zwei verschiedenen Gelegenheiten durchgeführt wurde.
Ergebnisse und Diskussion
Obwohl Exophiala
Umwelt Pilze sind, ihre Präsenz in klinischen Proben in zwei aufeinander folgenden Besuche gesammelt, sollte nicht als Verunreinigung außer Acht gelassen werden [20] . Schwarze Pilze sind seit Jahrzehnten bekannt, aber sie gehören zu den am schwierigsten Pilzgruppen zu identifizieren und damit die diagnostische Verwirrung war in der Vergangenheit üblich [8]. Aufgrund der Weiterentwicklung der molekularen Techniken und die Verfügbarkeit von DNA-Sequenzen von verschiedenen Genloci in Sequenzdatenbanken wie GenBank, die Identifizierung von Exophiala zu Artniveau
möglich gemacht wurde. Bisher hat nur berichtet, Hong Kong ein einziger Fall von E. dermatitidis
mit akuter myeloischer Leukämie 43 assoziierten Jahre alte Patientin periphere Blutstammzellentransplantation unterzogen [20]. Es wurde jedoch aus Stuhlproben isoliert.
Zunächst suchten wir Candida
Spezies aus dieser Patientenproben zu erholen. Wir beobachteten jedoch das Auftreten von ungewöhnlich dunkle Kolonien auf den SDA-Platten. Die Dunkelheit der Farbe erhöht, wenn die Kultur wird immer älter und nach ein paar Tagen erschien als "schwarze Pilz". Um Reinkultur zu erhalten, wurden weiter die schwarzen Pilzkolonien auf SDA für die zweite Runde subkultiviert, die dann Fleck auf Gram ausgesetzt waren. Zwei schwarze Pilze Isolate wurden in zwei Mundspülproben gefunden sind, wurden sie als OM2 und OM4 benannt. OM2 und OM4 zeigte Gram-positive Zellen unter dem Lichtmikroskop, mit 1000-facher Vergrößerung, deren Größe, Form und Farbe sind ähnlich wie C. albicans mit einigen Hyphen Elemente
. Als nächstes überzogen wir das Isolat auf CHORMagar neben Candida albicans
und Candida parapsilosis
. Pilzisolaten behielten ihre schwarze Farbe auf CHROMagar während C. albicans
und C. parapsilosis
klassische grüne und weiße Farbe zeigten jeweils (Abbildung 1). Wir auch klassische Candida
Identifizierung API 32C AUX-Methode verwendet, die negative Ergebnisse zeigten. Abbildung 1 Speziation von Isolaten von CHROMagar. Reinkultur von C. parapsilosis
und OM2 wurden auf dem gleichen CHROMagar Platte ausgestrichen (a). Und reine Kultur von C. albicans Karten und OM4 wurden auf einem anderen CHROMagar Platte (b) ausgestrichen. Beide OM2 und OM4 zeigte dunkelbraune Farbe auf der Platte, die ihre dunkle Farbe wurden beibehalten. Dann werden die Farben der Kulturen beobachtet wurden, und Bilder nach 48 Stunden Inkubation genommen.
Zu den Ergebnissen aus dem Plattendiffusionstest Mit Bezug sowohl der schwarzen Pilze Isolate waren resistent gegen Caspofungin (Tabelle 1). Darüber hinaus ist es bemerkenswert, dass OM2 Isolat Amphotericin B auch resistent war, während OM4 intermediäre Empfindlichkeit hatte isolieren. Amphotericin B wird als "Goldstandard" bei der Behandlung von Pilzinfektionen betrachtet [21]. Daher Pilzstämmen, die Resistenz gegenüber Amphotericin B sind, sollte besondere Aufmerksamkeit geschenkt werden. Allerdings waren beide Isolate anfällig für die Azol-Klasse von Antimykotika nämlich.
Fluconazol, Ketoconazol, Itraconazol und Voriconazol. Antimykotische Empfindlichkeits Daten über die klinische E. dermatitidis
Isolate sind noch spärlich trotz der Fortschritte in der Testmethoden. Im Allgemeinen scheinen Exophiala
Arten, die für Amphotericin B, Triazol und Terbinafin in vitro
. Jedoch klinische Wirksamkeit von Antimykotika gegen einige Stämme von Exophiala
bleibt umstritten, da die Patienten trotz antimykotische Therapie abgelaufen sind [22]. Daher Korrelation von in vitro-Ergebnisse und in vivo-Antwort aufgrund der Pharmakokinetik, Wirtsfaktoren, Beginn der Infektion und Therapie noch bestimmt werden. Ein Fallbericht zeigte E. dermatitidis
isolieren, dass resistent ist Klasse von Medikamenten zu Echinocandin: Caspofungin, microfungin und Anidulafungin, aber anfällig für Azole und Amphotericin B [23]. Eine weitere Studie von 43 Isolaten von E. dermatitidis
Anfälligkeit für Amphotericin B zeigte, Voriconazol, Itraconazol, 5-Fluorcytosin und Terbinafin. Allerdings hat diese Studie gezeigt, dass Amphotericin B eine schlechte Aktivität hat gegen E. dermatitidis
[24]. Daher wird empfohlen, sofort antimykotische Empfindlichkeitsprüfung durchzuführen, wenn E. dermatitidis
als Erreger im menschlichen infections.Table Verdacht 1 Das Ergebnis der antimykotische Empfindlichkeitsprüfung von Schwarz durch Plattendiffusionstest beurteilt Pilze
Proben
Kontrolle
Schwarze Pilze
C. albicans
C. parapsilosis
OM2
OM4
AMPH
ØMean
14.8
S
12,5
I
9.3
R
12,3
I
Reichweite
13-16
13.12
9-10
13.12
CASP5
ØMean
15.5
S
18
S
NA
R
NA
R
Bereich
14-17
17-19
NA
NA
FLUCZ
ØMean
50,8
S
36,5
S
25,3
S
30
S
Bereich
50-52
35-38
25-26
29-31
KETOC
ØMean
53,5
S
52
S
56,3
S
59,7
S
Reichweite
53-54
51-53
56-57
5,9-6
ITRAC
ØMean
22
S
18,5
S
25,7
S
26,3
S
Bereich
21-23
18-19
25-26
26-27
VOR. 1
ØMean
52,5
S
45,5
S
52,3
S
53,7
S
Bereich
51-54
44-47
52- 53
53-54
ØMean = Zone Durchmesser in mm; AMPH - Amphotericin B (Resistant: & lt; 10 mm; mittel: 10 mm - 14 mm; Anfällig: ≥15 mm), CASP5 - Caspofungin (Resistant: ≤12 mm; mittel: 13 mm - 15 mm; Anfällig: ≥16 mm ), FLUCZ - Fluconazol (Resistant: ≤14 mm; mittel: 15 mm - 18 mm; Anfällig: ≥19 mm), KTC - Ketoconazol (Resistant: ≤20 mm; mittel: 21 mm - 27 mm; Anfällig: ≥28 mm ), ITRAC - Itraconazol (Resistant: & lt; 13 mm; mittel: 14 mm - 22 mm; Anfällig: ≥23 mm), VOR. 1 - Voriconazol (Resistant: ≤13 mm; mittel: 14 mm - 16 mm; Anfällig: ≥17 mm); R fest, I-Zwischen, S-anfällig. Die Ergebnisse der XTT-Reduktionstest
zeigte, dass die schwarze Pilze, OM2 und OM4 konnten Biofilm zu bilden (Tabelle 2, Abbildung 2). Daher wird gemäß der XTT Lesen, E. dermatitidis
Formen vergleichbar Biofilm so gut wie C. albicans
SC5314. Biofilmbildung wird als wichtiger Virulenz bekannt Attribut direkt mit negativen Ergebnis der infections.Table
Candida assoziiert 2 Das Ergebnis der XTT-Reduktionstest und die Hämolysin und Proteinase-Aktivität von schwarzen Pilzen
XTT
Hemolysin
Proteinase
Probe
Abs Mittlere
Bereich
Hallo Mittlere
Bereich
Pr d Mittlere
Bereich
Kontrolle
C. albicans
1,92
1,73-2,09
1,73
1,43-2
1,94
1,83-2,07
C` parapsilosis
1,68
1,51-1,94
1.14
1,1-1,13
NA
NA
Schwarz fungi
OM2
2.03
1.8-2.36
2.33
2.22-2.55
NA
NA
OM4 Bei
2.15
1,91-2,43
NA
NA
NA
NA
ABS = Wert Absorption; Hallo = Hämolysin Index; Prd Wert = Proteinase Produktionsindex.
2 XTT-Reduktionstest von schwarzen Pilzen Abbildung nach 3 Stunden Inkubation. Die Dunkelheit einer orange Farbe dargestellt, die Menge des Biofilms. OM2 und OM4 zeigte eine starke orange Farbe nach 3 Stunden Inkubation in XTT-Reduktionstest, der so stark ist wie C. albicans
und stärker als C. parapsilosis
war. Die Lösung in jeder Vertiefung wurde durch Mikrotiterplatten-Lesegerät gemessen, und die resultierenden Absorptionsvermögenswerte wurden in Tabelle 2 aufgezeichnet
Es ist offensichtlich, die Hämolyse von Schafsblut-Agar von E. dermatitidis
OM2 Isolat (3a induziert zu sehen ). Es gab eine unverwechselbare durchscheinend Halo um die Inokulum-Website, die die positive hämolytische Aktivität zeigt. Die hämolytische Index (Hallo) war so hoch wie die von C. albicans
. Im Gegenteil, dermatitidis E.
OM4 Isolat eine negative Hämolysin-Aktivität (Figur 3b) gezeigt. Es ist ein unerwartetes Ergebnis, da beide Isolate von einem Patienten an der gleichen Stelle wiedergewonnen wurden. Eisen spielt eine wichtige Rolle für das Überleben eines invasiven Pathogen wie C. albicans
in dem menschlichen Wirt. Deshalb erfordern invasive Erreger Hämolysin Enzyme Eisen indirekt durch Lysieren eisenhaltige Proteine, wie Hämoglobin zu extrahieren. Allerdings bleibt genaue klinische Bedeutung dieser Befunde vollständig aufgeklärt werden. Abbildung 3 Fotografien die Hämolyse von Schafblutagar durch die schwarze Pilze induziert zeigt. Bild a und b zeigen die Hämolysin Aktivität von OM2 und OM4 sind. Zehn Mikroliter Kultursuspension wurden auf den Schlaf-Blut-Agar-Platte aufgetragen. Die Platte wurde beobachtet, und der Durchmesser des Halos wurde nach 2 Tagen Inkubation gemessen. Ein besonderes durchscheinend Halo um die Inokulum-Stelle wurde in eine, die ihre positive hämolytische Aktivität von OM2 gezeigt. Kein Halo in b zu sehen war, und deshalb OM4 wurde, da keine hämolytische Aktivität betrachtet.
Schlussfolgerungen
Abschließend berichteten wir über den ersten Fall der Isolierung von E. dermatitidis
Spezies aus der menschlichen Mundhöhle. Darüber hinaus erzielten wir auch Pionier Daten über die Virulenz als Biofilmbildung solcher Attribute, Hämolysin und Proteinase-Test. Bemerkenswert ist, eine dieser E. dermatitidis
Isolate war resistent gegenüber Caspofungin und Amphotericin B, die beiden besten Antimykotika zur systemischen Pilzinfektionen auf dem Markt verfügbar. Dieser Befund weitere klinische Studien zu diesem aufstrebenden Pilzpathogens gerechtfertigt, vor allem unter dem wachsenden Körper der immungeschwächten Bevölkerung einschließlich Patienten mit NPC. Einwilligung Bei
schriftliche Einverständniserklärung des Patienten für die Veröffentlichung des vorliegenden Falles Bericht erhalten wurde und der dazugehörigen Bilder. Eine Kopie der schriftlichen Zustimmung zu einer Überprüfung durch die Redaktion dieser Zeitschrift zur Verfügung stand.
Hinweise
Chaminda Jayampath Seneviratne, Phoenix HL Fong und Victor HF Lee trugen gleichermaßen zu dieser Arbeit.
Erklärungen
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde für die Bekämpfung von Infektionskrankheiten, Ernährung und Gesundheit Bureau, Hong Kong SAR Government durch den Forschungsfonds unterstützt: 11100722.
konkurrierende Interessen
die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben
. Beiträge der Autoren
CJS und VHFL konzipiert und die Studie konzipiert. VHFL geführt, um die Probenentnahme. PHLF geführt, um die Experimente. CJS, PHLF, analysiert SSWW die Daten. CJS, PHLF, SSWW und VHFL schrieb das Manuskript. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.
