Zusammenfassung
Hintergrund
zugeordnet, um langfristige Prognose und definieren individuelle Behandlungsmethoden für Patienten vorherzusagen mit oralen Plattenepithelkarzinom (OSCC), zuverlässiger Tumor-Biomarker sind bei der Vorbehandlung Aufarbeitung Zeitraum benötigt. Die vorliegende Studie zielte darauf ab zuverlässiger immunhistochemischen Tumor prognostische Marker bei der Vorbehandlung Biopsien von Patienten mit OSCC.
Methoden zur Identifizierung
Wir wählten 57 Patienten, die mit primären OSCC durch histopathologische Analyse diagnostiziert wurden. Die Vorbehandlung Biopsieproben wurden immunhistochemisch für den Transkriptionsfaktor NANOG analysiert, Krebsstammzellmarker CD44 und mutierten Tumorprotein 53 (p53-Mutante). Die Immunfärbung Muster wurden für ihre Verbindung mit den klinisch-pathologischen Eigenschaften von OSCC und Gesamtüberlebensraten bewertet.
Ergebnisse
Spättumorstadium, positive Hals Knoten Metastasen, und hochgradige Differenzierung wurden mit deutlich schlechteren Überlebensrate verbunden. Eine verstärkte Expression von NANOG und mutierten p53-Positivität waren signifikant mit klinisch späten Stadium Tumoren, positive Hals Knoten Metastasen, histologisch hochgradige Tumore und schlechte Raten des Gesamtüberlebens. OSCCs mit starken Co-Detektion von NANOG und mutierten p53 wurden deutlich niedrigere Überlebensrate als die mit den beiden schwachen NANOG Expression und p53 Negativität verknüpft. Eine erhöhte Expression von CD44 hatten eine begrenzte Korrelation mit ungünstigen klinisch-pathologischen Eigenschaften.
Fazit hohe Expression von NANOG und positiven Ausdruck des mutierten p53 in der Vorbehandlung Biopsien von Patienten mit OSCC wurden im Zusammenhang mit schlechten Überlebensraten und ungünstigen klinisch-pathologischen Eigenschaften
. Diese Ergebnisse zeigen, dass NANOG, mutant p53 und CD44 könnte als immunhistochemischen Marker in den Vorbehandlungsproben OSCC verwendet werden. Insbesondere Analyse für die Co-Expression von NANOG und mutierten p53 sollte als Instrument für die Prognose und der Auswahl der einzelnen Behandlungsmethoden sehr zur Verfügung gestellt werden.
Schlüsselwörter Oral
Plattenepithelkarzinomen Tumormarker Immunhistochemie NANOG Mutant p53 Hintergrund Oral Plattenepithelkarzinom (OSCC) ist eine häufige bösartige Tumor des Kopf- und Halsbereich; jedoch Patienten mit OSCC haben eine 5-Jahres-Überlebensrate von weniger als 50%. Die traditionellen TNM und histopathologischen Grading-Systeme keine Ärzte ermöglichen genau ein Tumor Aggressivität oder wählen Behandlungsmodalitäten auf individueller Basis zu prognostizieren [1]. Daher wurde Forschung Gange effektiver und definitive Tumorprognostische Marker für Patienten mit OSCC [2, 3] zu untersuchen. Als Krebsstammzellen (CSC) Hypothese einer der vorherrschenden Theorien geworden ist, den Tumor-initiierenden Kapazität und Heterogenität von Tumorzellen zu erklären, wurden verschiedene Stammzellmarker untersucht worden, um ihre Korrelation mit klinisch-pathologischen Tumor Eigenschaften und Langzeitprognose zu bestimmen [4 -8].
die frühe Transkriptionsfaktoren NANOG, OCT4 und SOX2, die eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung der pluripotenz und Selbsterneuerungsvermögen in beiden embryonalen und adulten Stammzellen spielen, auch als Schlüsselregulationsfaktoren in der berichtet CSCs von Kopf und Hals Plattenepithelkarzinom (HNSCC) [7, 8]. Hohe Expression von NANOG und OCT4 wurde mit histologisch hochgradige Karzinome und klinisch schlechte Prognose [7-10] positiv korreliert. CD44 war die erste in einer soliden malignen Erkrankungen beschrieben CSC Marker [5] und eine hohe Frequenz von CD44-positiven Zellen in HNSCC stark mit einem Rezidiv korreliert und Tumoraggressivität [11]. Tumor-Protein 53 (p53) ist ein traditionelles Tumorbiomarker in Plattenepithelkarzinom (SCC) in Betracht gezogen; jedoch seine Nützlichkeit als prognostischer Indikator bleibt unklar [1]. Wildtyp-p53-Protein ist kaum nachweisbar in normalen Geweben wegen seiner kurzen Halbwertszeit von etwa 20 min. [12] Jedoch ist das Tumorsuppressorgen p53 etwa 40-60% der Fälle in OSCC mutiert, und das mutierte p53 spielt eine wichtige Rolle bei der Tumorentstehung und Progression [12, 13]. Interessanterweise mutierten p53-Protein ist in der Regel nachweisbar über die Immunhistochemie (IHC) [14, 15].
Um eine langfristige Prognose und definieren individuelle Behandlungsmethoden für Patienten mit OSCC, zuverlässiger Tumor-Biomarker (einschließlich immunhistochemischen prognostische Marker) zur Vorhersage werden während der Vorbehandlung Aufarbeitung Zeitraum benötigt. Die vorliegende Studie soll die Expression verschiedener Tumormarker mittels IHC, einschließlich Stammzellen und tumorbedingte Biomarker zu untersuchen, zuverlässigere prognostische Marker in OSCC Biopsieproben gesammelt vor der Krebsbehandlung zu identifizieren. In der vorliegenden Studie beobachteten wir eine positive Korrelation zwischen den klinisch-pathologischen Eigenschaften von OSCCs und immunhistochemischen Expressionsmuster von NANOG, menschlichen p53-Mutante und CD44. Darüber hinaus wurden die Immunfärbung Intensitäten dieser Markerproteine (NANOG und mutierten p53) positiv mit der Gesamtüberlebensrate von Patienten mit OSCC korreliert.
Methoden
Patienten
Zwischen 2004 und 2014 wurden bei insgesamt 92 Patienten waren mit OSCC in der Klinik für Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgie der Gyeongsang National University Hospital (GNUH) auf der Grundlage der histopathologischen Analyse von Biopsieproben gesammelt vor der Krebsbehandlung diagnostiziert. Unter ihnen, 57 Patienten mit primärer OSCC (ohne Patienten mit metastasiertem und rezidivierenden Krebs, 36 Männer und 21 Frauen) wurden für die vorliegende Studie ausgewählt. Die Einschlusskriterien waren Patienten, die an der Studie teilnehmen vereinbart, mindestens 3 Monaten Follow-up abgeschlossen nach der Vorbehandlung Biopsie unterzogen und hatte Volumen ausreichend Gewebe in der Probe Vorbehandlung Biopsie immunhistochemischen Färbung durchzuführen. Die Krankenakten der ausgewählten Patienten wurden retrospektiv analysiert. Die Einwilligungserklärung für die Nutzung ihrer Gewebeproben wurde von allen Patienten erhalten, und diese Studie wurde von der Ethikkommission für klinische Forschung bei GNUH (GNUH IRB-2012-09-004-002) zugelassen. IHC auf den Vorbehandlungs Biopsien der 57 Patienten durchgeführt wurde, die sich von der Peripherie des Tumorrand mit einer Mindestlänge von 5 mm und minimale Breite und Tiefe 2 mm erhalten wurden, die die Beziehung zwischen Proteinexpressionsmuster und klinisch-pathologischen Tumormerkmale zu analysieren . Die Dauer des Follow-up für die 57 Patienten reichten von 3 bis 127 Monate, mit einem Mittelwert von 35,9 Monate. Die Patienten wurden klinisch nach dem System TNM-Klassifikation von der American Joint Committee on Cancer (7
th edition, 2010) für Tumorstadium und Hals Knoten Metastasen, und die allgemeine Überlebensraten wurden ebenfalls bestimmt entwickelt ausgewertet. Biopsie-Proben wurden histologisch abgestuft und Tumore wurden als gut eingestuft, mäßig oder schlecht differenziert nach der WHO-Klassifikation der Tumoren [16].
Immunhistochemische Analyse von Biopsieproben
Biopsie-Proben in 10% neutral gepuffertem Formalin fixiert wurden für 24 h, in einem Paraffinblock eingebettet, in 4-um-Schnitte geschnitten und montiert auf SuperfrostPlus Mikroskop-Objektträger (Fisher Scientific, Rochester, NY, USA). Die Schnitte wurden bei Raumtemperatur für 12 h gehalten. Nach der Hydratisierung, IHC für NANOG, CD44 und mutierten p53 wurde mit einem automatisierten immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical System Inc., Tucson, AZ, USA) durchgeführt, und die Visualisierung wurde mit der Ultra DAB-Kit (Ventana Medical System Inc. durchgeführt ) gemäß dem Protokoll des Herstellers. Für die Immunfärbung der drei Markerproteine verwendeten wir Kaninchen monoklonale Antikörper (Abcam ™, Cambridge, UK). Die Verdünnungsrate und Losnummern der primären Antikörper sind in Tabelle 1 Kurz zusammengefaßt wurden die Schnitte entparaffiniert EZ Prep-Lösung; dann (enthielt pH 8,4 Puffer Tris /Borat /EDTA) CC1 Standard wurde bei 100 ° C für 60 min für die Antigen-Retrieval angewendet. Die Objektträger wurden bei 37 ° C für 4 min mit einem DAB-Hemmstoff (3% H 2 O 2) zu blockieren endogene Peroxidase-Aktivität inkubiert. Dann wurden die Objektträger für 32 min mit dem primären Antikörper bei 37 ° C inkubiert, gefolgt von einer Inkubation mit dem sekundären Antikörper (Universal HRP Multimer) für 8 min bei 37 ° C. Die Objektträger wurden mit DAB + H 2 O 2 Substrat für 8 min, gefolgt von Hämatoxylin II und Bläu- Reagenz bei 37 ° C für die Kerngegenfärbung. Für negative Kontrollen wurde nur der Inkubation mit dem sekundären Antikörper durchgeführt, jede Inkubation mit einem primären Antikörper, in Abschnitten von den gleichen Proben unter den gleichen Bedingungen weggelassen. Ferner wurden menschliche embryonale Harnblase und Hautkarzinom Gewebe als Positivkontrollen für NANOG, CD44 und mutanten p53 bzw. gemäß den Antikörper Herstellers recommendations.Table 1 Zusammenfassung der klinisch-pathologischen Eigenschaften von OSCCs und IHC Expressionsmuster von NANOG, CD44 verwendet und mutierten p53
NANOG
CD44
Mutant p53
Gesamt No.
+++
++
+&–
++
+
–
+
–
No. von cases
57
21
18
18
28
21
8
34
23
Tumor Websites
Gingiva
27
13
8
6
10
11
6
13
14
Cheek
4
0
3
1
2
2
0
3
1
Palate
10
4
3
3
9
1
0
10
0
Tongue
9
0
2
7
2
5
2
4
5
FOM
7
4
2
1
5
2
0
4
3
Tumor Bühne
I + II
24
6
4
14
10
9
5
11
13
III + IV
33
15
14
4
18
12
3
23
10
Neck Knoten
N0
34
9
10
15
13
15
6
16
18
N+
23
12
8
3
15
6
2
18
5
Histo Grad
Well
22
4
4
14
9
9
4
6
16
Mod + Poor
35
17
14
4
19
12
4
28
7
Antibody
Verdünnungsrate
1: 250
1: 100
1: 200
Quelle (Lot No.)
Abcam ™ (ab109250)
Abcam ™ (ab51037)
Abcam ™ (ab32049)
Abkürzungen: FOM
Etage Mund, negativ Hals Knoten
N0, N +
positive Hals Knoten, Well
gut differenzierten OSCC, Mod + Schlechte
mäßig und schlecht differenzierten OSCC
Gewebescheiben wurden semi-quantitativ analysiert für Antikörper Ablagerung in zellulären Komponenten durch zwei Pathologen, die an der Studie Informationen geblendet wurden. Basierend auf einer zuvor beschriebene Verfahren mit einer Modifikation [10], positive Immunfärbung von NANOG und CD44 wurde durch die Kombination der Intensität erzielt (0, negative Färbung; 1, schwache Färbung; 2, moderate Färbung und 3, eine starke Färbung) und der prozentualen positiv gefärbter Tumorzellen in Hochleistungsfeldern (0, negativ; 1, & lt; 25%; 2, 25-50%, 3, 51-75%; und 4 & gt; 75%). Die Summe der Färbeintensität und Prozentsatz positiver Tumorzell Noten abgestuft wurde wie folgt: +++ (stark, 6-7); ++ (Mäßig, 4-5); + (Schwach, 2-3); und - (negativ, 0-1). Das Expressionsmuster von p53-Mutante erzielt wurde auch die Kombination von Färbungsintensität und den Prozentsatz der positiven Tumorzellen verwenden und einfach als + benotet für positive (Summe der Punkte überschritten 3) und - für negative (2 oder weniger; negativer Ausdruck oder schwach Ausdruck in weniger als 25% der Zellen), im Einklang mit früheren Berichten [10, 17, 18]. Mindestens drei verschiedene Felder, die unter hoher Vergrößerung (× 400) pro Folie wurden für die Immunfärbung Intensität analysiert. Eine Zusammenfassung der immunhistochemischen Färbung Ergebnisse können in Tabelle 1
statistische Analyse und die Gesamtüberlebensanalyse
die Beziehung zwischen den Ausdruck Intensitäten von NANOG, mutiertes p53 und CD44 in OSCC Proben wurde statistisch ausgewertet mit dem chi- finden Quadrat-Test. In ähnlicher Weise wurde die Korrelation zwischen den Proteinexpressionsmuster und klinisch-pathologischen Eigenschaften von OSCC, einschließlich Tumorstadium, Hals Knoten Metastasen, und histologischen Grad, auch mit dem Chi-Quadrat-Test analysiert. Die Gesamtüberlebensanalyse wurde mit der Kaplan-Meier-Methode durchgeführt und die Daten wurden unter Verwendung eines Log-Rank-Test für die 57 OSCC Proben verglichen. Zunächst wurde die Gesamtüberlebensanalyse in Bezug auf die Behandlungsmethode sowie klinisch-pathologischen Tumormerkmale, einschließlich Tumorstadium, Hals Knoten Metastasen, und histologischen Grad (Abb. 5a-d) durchgeführt wird. In der vorliegenden Studie wurden die Patienten aufgeteilt nach Behandlungsmethoden in drei Gruppen: Operation nur (Surg), kombinierte Operation mit adjuvante Strahlentherapie (Surg + RT, einschließlich gleichzeitige Radiochemotherapie) und Strahlentherapie nur (RT). Die meisten Patienten in der RT-Gruppe unterzog palliative Strahlentherapie, weil sie nicht operiert werden wollte oder ihre Tumoren waren inoperabel. Zweitens Überlebensanalyse wurde im Hinblick auf die Immunfärbung Intensitäten von NANOG, mutiertes p53 und CD44 bei der Vorbehandlung Biopsien (Abb. 5e-h) durchgeführt. Univariate und multivariate Analysen wurden mittels eines Cox Proportional-Hazards-Regressionsmodell durchgeführt. Alle Analysen wurden mit Hilfe von IBM SPSS Statistics-Software (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) durchgeführt. Die Fälle wurden zum Zeitpunkt zensiert entweder über den Tod des Patienten oder der letzten Follow-up. Die Ergebnisse wurden bei p & lt
signifikant angesehen; 0,05, und diese Unterschiede durch ein Sternchen oder verschiedenen Buchstaben bezeichnet wurden.
Ergebnisse
Informationen von Patienten mit insgesamt 57 Patienten mit OSCC ausgewählt
bestehend aus 36 Männern und 21 Frauen wurden in die Studie eingeschlossen. Das Patientenalter lag im Bereich von 17 bis 90 Jahren (Mittelwert 65,4 ± 13,9 Jahre). Die Website von OSCC bei den Patienten waren die Gingiva (27 Fälle), Gaumen (10 Fälle), Zunge (9 Fälle), Mundboden (7 Fälle), und Wange (4 Fälle) (Tabelle 1). Die Patienten wurden nach Behandlungsmethode wie folgt aufgeteilt: 15 Patienten in der Gruppe Surg, 22 Patienten in der Surg + RT-Gruppe und 20 Patienten in der RT-Gruppe. Die mittlere Follow-up-Periode bei allen Patienten war 35,9 Monate; mittlerweile, 24 Patienten (19, 4 und 1 Patient in der RT, Surg + RT und Surg Gruppe) starben nach durchschnittlich 18,4 Monaten und 33 Patienten überlebten mehr als einem durchschnittlichen Follow-up von 48,7 Monate. In allen Fällen der Operation wurden die Resektion Tumorränder als mindestens 2 cm und die Resektion Feld wurde bestätigt gesetzt tumorfrei mit gefrorenen Biopsie Abschnitte zu sein.
Expressionsmuster von NANOG, mutierten p53 und CD44 in OSCC Vorbehandlung Biopsie Proben
NANOG wurde hauptsächlich in den Kernen von OSCC Zellen detektiert, aber einige NANOG Expression wurde in das Zytoplasma der Krebszellen nachgewiesen. Mutant p53 wurde in den Zellkernen von Krebszellen lokalisiert, wohingegen CD44 wurde in der Zellmembran von OSCC Zellen (Fig. 1) detektiert. Die Anzahl der positiven Zellen und die Expressionsintensitäten waren in der Regel größer in hochwertigen OSCCs (mäßig oder schlecht differenziert) als in Low-Grade-Tumoren (gut differenziert) (Abb. 1 und 2). Von den 57 OSCC Proben, war der Ausdruck NANOG stark in 21 Proben, moderat in 18 Proben untersucht und schwach oder negativ in 18 Proben. Mittel, schwach, und negative Expression von CD44 wurde in 28, 21 und 8 OSCC Proben bzw. beobachtet. Darüber hinaus wurden 34 Proben positiv für mutiertes p53, während 23 Proben waren negativ (Tabelle 1). Feige. 1 Immunhistochemische Färbung von NANOG, mutiertes p53 und CD44 in OSCCs. a Serienschnitte von mäßig differenzierten OSCC Proben zeigen moderate Expression von NANOG und CD44 und positive Expression von mutiertem p53. b In höherer Vergrößerung Bereichen Serienschnitten wird NANOG hauptsächlich in den Zellkernen detektiert wird aber auch im Zytoplasma von einigen Tumorzellen exprimiert. Mutant p53 wird in den Kernen von Tumorzellen nachgewiesen, während CD44 in den Membranen der Krebszellen lokalisiert ist. Die Pfeile zeigen die Co-Expressionsstellen von NANOG, mutierten p53 und CD44 in OSCCs. Maßstabsbalken = 50 & mgr; m
Abb. 2 Immunostaining gut (a & amp; b) und schlecht (c) differenziert OSCCs. ein in Serienschnitten, die negative Expression von NANOG, mutiertes p53 und CD44 wird in einer Probe von gut differenzierten OSCC (* Gewebe zeigt an Krebs) nachgewiesen. b In einem anderen Fall von gut differenzierten OSCC, NANOG und mutiertem p53 sind fast negativ, in weniger als 25% positive Zellen beobachtet, wohingegen CD44 schwach in der Krebszellmembran (Pfeile) detektiert wird. c in einem schlecht differenzierten OSCC Probe, verstärkte Expression von NANOG, mutiertes p53 und CD44 erkannt wird. Die Pfeile zeigen die Co-Lokalisierung der drei Markerproteine. Maßstabsbalken = 50 & mgr; m
Direkte Beziehungen zwischen den Expressionsintensitäten von NANOG, mutierten p53 und CD44 wurden beobachtet (Abb. 3a). Tumoren mit starker Ausdruck von NANOG zeigte auch häufig positive mutierten p53-Expression (p
= 0,002) und erhöhte CD44-Expression (p
& lt; 0,001). In ähnlicher Weise Tumoren mit positiven Ausdruck mutierten p53 angezeigt Expression von CD44 verbessert (p
& lt; 0,001) (Abb. 3a). In einigen Fällen Coexpression NANOG, mutant p53 und CD44 wurde in serielle Abschnitte der gleichen OSCC Proben nachgewiesen, was darauf hinweist, dass einige Krebszellen Koexpression dieser drei Markerproteine aufweisen. Interessanterweise wurde die Co-Expression von allen drei Proteinen häufiger in mäßig oder schlecht differenzierten OSCCs beobachtet (Fig. 1b und 2c). Feige. 3 Korrelation der Expressionsmuster von NANOG, mutierten p53 und CD44 und dem histologischen Grad von OSCCs. ein Tumoren mit erhöhter Expression von NANOG zeigen eine höhere Frequenz von mutierten p53-Positivität (p
= 0,002) und erhöhte CD44-Expression (p
& lt; 0,001). In ähnlicher Weise zeigen OSCCs mit positiven Ausdruck des mutierten p53 höhere Expression von CD44 (p
& lt; 0,001). b Starke oder moderate Expression von NANOG signifikant zu histologisch hochgradige OSCCs (; 0,001 p
& lt) bezogen; jedoch schwach oder negativ Ausdruck NANOG korreliert mit gut differenzierten Karzinom (p = 0,018
). Außerdem ist positiv mutierten p53-Expression signifikant mit hochgradigen Karzinom (p
& lt; 0,001). In ähnlicher Weise wird verstärkt CD44 Expression mit hochgradigen Tumoren assoziiert, aber keine statistische Signifikanz beobachtet wurde (p = 0,058
). Die Daten repräsentieren die Anzahl der Fälle mit positivem Ausdruck jedes Proteins, und ein Sternchen (*) zeigt signifikante Unterschiede (p
& lt; 0,05). [Abkürzungen: NANOG (++ /+++), starke oder moderate Expression von NANOG; NANOG (+/-), schwache oder negative Ausdruck NANOG; p53 (+), positive Expression von mutierten p53; p53 (-) negative Expression von mutierten p53; CD44 (++), mehr als moderate Expression von CD44; CD44 (+), eine schwache Expression von CD44; CD44 (-), negativer Ausdruck von CD44; Nun, gut differenzierte OSCCs; Mod + Schlechte, mäßig und schlecht differenzierten OSCCs]
Assoziation zwischen klinisch-pathologischen Tumoreigenschaften und die Expressionsmuster von NANOG, mutierten p53 und CD44
starke Expression von NANOG war signifikant korreliert mit histologisch hochgradige OSCCs (p
& lt; 0,001), wohingegen schwache oder negative Expression von NANOG überwiegend in gut differenzierten Karzinomen (p = 0,018
) aufgetreten ist. (Abb. 3b); Ähnlich positive Ausdruck mutierten p53 signifikant mit hochgradigen Karzinome (0,001 p
& lt) verbunden war. Hochgradigen Tumoren verstärkte Expression von CD44 zeigte, aber dieses Ergebnis statistisch nicht signifikant war (Fig. 3b). Bei der Beurteilung der Beziehung zwischen der Proteinexpression und Tumorstadium, stark und moderate Expression von NANOG angezeigt direkten Assoziationen mit Spätstadium Tumoren (Stadium III und IV; p
& lt; 0,05), während eine schwache Expression von NANOG direkt verbunden war mit Frühstadium Tumoren (Stadium I und II; p
= 0,018) (Abb. 4a). Positive mutierten p53-Expression wurde in der späten Phase Tumoren (p = 0,049
) häufig beobachtet. In ähnlicher Weise eine höhere Expression von CD44 wurde häufig in der späten Phase Tumoren beobachtet, aber der Unterschied war statistisch nicht signifikant (Fig. 4a). Bei der Analyse von Hals Knoten Metastasen, schwache oder negative Expression von NANOG deutlich negativen Hals Knoten Metastasen im Zusammenhang wurde im OSCCs (p
= 0,005) (Abb. 4b). Ähnlich negativen Expression von mutiertem p53 (p = 0,007
) und eine schwache Expression von CD44 (p
= 0,049) wurden zu einer höheren Frequenz von negativen Halsknoten Metastasierung (Fig. 4b) deutlich verwandt. Feige. 4 Korrelation von Tumorstadium oder Hals Knoten Metastasen und die Immunfärbung Muster von NANOG, mutierten p53 und CD44. eine starke oder moderate Expression von NANOG direkt mit Spätstadium Tumoren assoziiert ist, wohingegen schwache oder negative Expression von NANOG direkt im Frühstadium Karzinom (p
& lt; 0,05) bezogen ist. Positive Expression von mutiertem p53 auch signifikant mit Spätstadium Tumoren (p
= 0,039) in Verbindung gebracht. Höhere Expression von CD44 wird häufig mit Spätstadium Tumoren assoziiert, aber keine statistische Signifikanz beobachtet wurde (p
& gt; 0,05). b Tumoren mit schwachen oder negativen Ausdruck NANOG (p = 0,004
), negativ Expression von mutiertem p53 (p = 0,006
) und eine schwache Expression von CD44 (p = 0,049
) zeigen eine deutlich höhere Frequenz negativer Hals Knoten Metastasen. Höhere Expressionsniveaus der drei Proteine nicht mit Halsknoten Metastasierung (p
& gt; 0,05) zugeordnet ist. Die Daten repräsentieren die Anzahl der Fälle mit positivem Ausdruck jedes Proteins, und ein Sternchen (*) zeigt einen signifikanten Unterschied (p
& lt; 0,05). [Abkürzungen: I + II, Tumorstadium I & amp; II; III + IV, Tumorstadium III & amp; IV; N0, negativen Hals Knoten Metastasen; N +, positive Hals Knoten Metastasen]
Survival Analyse
Die Analyse der gesamten Patientenüberlebensraten in Bezug auf die klinisch-pathologischen Tumormerkmale ergab einige signifikante Ergebnisse (Abb. 5a-d). Patienten mit Spätstadium OSCC (Stadium III und IV) hatten eine statistisch signifikant geringere Überlebensrate als die mit frühen Stadium Tumoren (Stadium I und II) (p
& lt; 0,05, Abb. 5a). Patienten mit OSCC und positive Hals Knoten Metastasen zeigten eine signifikant schlechtere Überlebensrate als solche mit negativem Hals Knoten Metastasen (p
& lt; 0,01, 5b.). Außerdem können Patienten mit histologisch hochgradige OSCC hatten eine schlechtere Prognose als solche mit gut differenzierten Tumoren (p
& lt; 0,01, 5c.). In Bezug auf die Behandlungsmethode zeigte die RT-Gruppe eine signifikant schlechtere Überlebensrate als die Surg und Surg + RT Gruppen (p
& lt; 0,01, Abb. 5d). Feige. 5 Die Gesamtüberlebensrate von OSCC Patienten nach klinisch-pathologischen Tumor Merkmale, Behandlungsmethode und Immunfärbung Muster von NANOG, mutierten p53 und CD44. A-Patienten mit Spätstadium Tumoren (Stadium III & amp; IV) zeigen eine signifikant schlechtere Überlebensrate (p
& lt; 0,05). b-d eine positive Assoziation zwischen der Gesamtüberlebensrate von OSCC Patienten und histopathologischen Tumorgrad, Hals Knoten Metastasen und Behandlungsmethode beobachtet. Die gut differenzierten OSCC Gruppe, negativ Hals Knotengruppe, und chirurgische zeigen Behandlungsgruppe signifikant bessere Langzeitüberlebensraten als die entsprechenden entgegengesetzten Gruppen (p
& lt; 0,01). e verstärkte Expression von NANOG ist mit einer schlechten Überlebensrate assoziiert sind; insbesondere Patienten mit starken oder mittelschweren Ausdruck NANOG zeigen deutlich geringere Überlebensrate als jene mit schwachen oder negativen NANOG Ausdruck (p
& lt; 0,01). f Patienten mit mutiertem p53 (+) - exprimierenden Tumoren zeigen eine geringere Überlebensrate als die mit Tumoren negativ für mutiertes p53 (-) (p
& lt; 0,01). g Verbesserte CD44 Expression üblicherweise einher mit schlechten Überlebensraten zu korrelieren, aber keine statistische Signifikanz gefunden wurde (p
& gt; 0,05). h OSCCs mit Co-Expression von verbesserten NANOG und mutierten p53 [NANOG (++) /p53 (+)] korrelieren mit einer deutlich geringeren Gesamtüberlebensrate als jene mit schwachen NANOG und p53 Negativität [NANOG (+/-) /p53 ( -)] (p = 0,014
). Bemerkenswerterweise gab es keine Todesfälle in den 12 Fällen von NANOG (+/-) /p53 (-) während des Follow-up-Periode. Unterschiedliche Buchstaben bezeichnen statistisch signifikanten Unterschiede zwischen den Gruppen (p
& lt; 0,05)
Außerdem Überleben Analyse in Bezug auf die Immunfärbung Muster von NANOG, mutierten p53 und CD44 ergab statistisch signifikante Unterschiede (Abb 5e-h.). Der Ausdruck Intensität von NANOG wurde direkt mit der Gesamtüberlebensrate assoziiert sind; Patienten mit starken NANOG-exprimierenden Tumoren [NANOG (+++)] hatte als die schlechtere Überlebensraten mit schwachen oder negativen NANOG-exprimierenden Tumoren [NANOG (+/-)] (S.
. & lt; 0,01, Abb 5e) . In ähnlicher Weise wurde eine positive Assoziation zwischen mutierten p53-Expression und die Gesamtüberlebensrate beobachtet; Spezifisch Patienten mit p53-positive OSCC hatten niedrigere Überlebensrate als die mit p53-negativen OSCC (p
. & lt; 0,01, Fig 5f). Verbesserte CD44-Expression wurde mit schlechten Überlebensraten assoziiert, aber dieses Ergebnis statistisch nicht signifikant war (p
& gt; 0,05, Fig 5g.). Interessanterweise Patienten mit Co-Expression von verbesserten NANOG (moderate oder starke Expression) und p53-Positivität [NANOG (++) /p53 (+)], hatten signifikant kürzere Überlebensrate als Patienten mit schwachen NANOG und negativen p53-Expression [NANOG (+ /-) /p53 (-)] (p = 0,014
, Fig 5h).. Von Bedeutung ist, unter den 28 Patienten mit NANOG (++) /p53 (+) Tumoren, 17 Patienten starben, während es in den 12 Patienten mit NANOG keine Todesfälle waren (+/-) /p53 (-) Läsionen während der folgenden up-Periode (Abb. 5h). Univariate Cox Proportional-Hazards-Regressionsanalyse zeigte, dass Hals Knoten Metastasen, histologisch hochgradige Tumor und Stadium späten Tumor mit deutlich schlechteren Prognose assoziiert waren. Außerdem verstärkte Expression von NANOG und mutiertem p53, insbesondere co-Nachweis dieser beiden Proteine, in die OSCC Vorbehandlung Biopsien wurde direkt mit einer geringeren Überlebensrate (Tabelle 2) zugeordnet ist. In ähnlicher Weise illustriert die multivariaten Cox-Proportional-Hazards-Regressionsmodell, dass Hals Knoten Metastasen, histologischen Grad und immunhistochemischen Expressionsmuster von NANOG direkt auf die Gesamtüberlebensrate von Patienten mit OSCC bezogen wurden (Tabelle 3) .Tabelle 2 Univariate Cox Proportional-Hazards-Regressionsanalyse bezogen auf das Gesamtüberleben der 57 OSCC Patienten
Gesamt-Überleben
Variable
P
Wert
Hazard Ratio
95% CI
Neck Knoten
& lt; 0,001 *
6,795
2,745 bis 16,817
Grading
0,003 *
12,271
2,336 bis 64,465
Tumor
stage
0.009*
3.718
1.385–9.980
NANOG
0.019*
4.494
1.275–15.839
Mutant p53
0.016*
3.747
1.279–10.977
CD44
0.263
2.315
0.532–10.097
NANOG + P53
0,028 *
0.741
0,217-2,531
Abkürzung: CI
Konfidenzintervall
* Statistisch signifikant ( p
& lt; 0,05)
Tabelle 3 Multivariate Cox proportional-Hazards-Regressionsanalyse in Bezug auf das Gesamtüberleben der 57 OSCC Patienten Gesamtüberleben
Variable
P
Wert
Hazard Ratio
95% Cl
Neck Knoten
0,004 *
6.549
1,800 bis 23,822
Grading
0,012 *
3,598
1,330-9,937
Tumor stage
0.254
3.546
0.403–31.225
NANOG
0.035*
4.319
3.351–27.476
Mutant p53
0.180
1.195
1. 713-5,754
Abkürzung: CI
Konfidenzintervall
* Statistisch signifikant (p
& lt; 0,05)
Diskussion
Seit dem Aufkommen der CSC-Hypothese ein Schlüssel Theorie Krebsprogression, die Expressionsmuster von mehreren pluripotenten Stammzellmarker und Transkriptionsfaktoren untersucht wurden, in verschiedenen Krebsgeweben oder Zelllinien zu bestimmen, deren Korrelation mit lang~~POS=TRUNC zu erklären. In der vorliegenden Studie wurden die frühen Transkriptionsfaktor NANOG, CD44 die CSC-Marker und menschliche p53-Mutante wurden immunhistochemisch in der Vorbehandlung Biopsien von 57 Patienten mit OSCC sucht jede Beziehung ihrer Expressionsmuster mit klinisch-pathologischen Tumor Merkmale und die Prognose der Patienten zu identifizieren. Die Ergebnisse dieser Studie zeigten, dass die immunhistochemischen Expressionsmuster von NANOG und mutierten p53 direkt mit der Gesamtüberlebensraten sowie klinisch-pathologischen Eigenschaften assoziiert wurden, einschließlich Tumorstadium, Hals Knoten Metastasen und histologischen Grad. Patienten mit OSCC, deren Tumoren hatten höhere Expression von NANOG und mutierten p53 hatte weniger günstige klinisch-pathologischen Eigenschaften und niedrigeren Überlebensraten. Eine verstärkte Expression von CD44 wurde auch mit einer schlechten Prognose und niedrigeren Überlebensraten assoziiert, aber keine statistische Signifikanz beobachtet wurde. Vor kurzem wurde eine gemeinsame Modalität für die Vorhersage von Krebsprognose die Messung von intra-Tumor genetische Heterogenität gewesen [19, 20]. Heterogenität zeigt, dass Tumoren aus mehreren klonale Subpopulationen von unterschiedlichen charakteristischen Zellen zusammengesetzt sind, und somit eine histologische Untersuchung zeigt häufig Unterschiede in der Zellmorphologie und Eigenschaften unter den Zellen in den gleichen Krebsprobe [20]. Verbesserte intratumorale Heterogenität wurde direkt mit einer erhöhten Sterblichkeit korreliert; insbesondere hohe Heterogenität und Positivität p53-Mutation wurden mit höheren Sterblichkeitsraten in einer großen Kohortenstudie von Kopf- und Halskrebs [19] verbunden. In der vorliegenden Studie wurden Serienschnitte von Tumorproben zeigte, häufig die Co-Expression von NANOG, mutiertes p53 und CD44, die mit schlechteren Prognose verbunden war. Der Co-Detektion dieser verschiedenen Markerproteine in der gleichen Krebszelle oder gleichen Tumorregion kann eine hohe Tumor Heterogenität darstellen.
NANOG ist eine frühe Transkriptionsfaktor und pluripotent Marker, die die Selbsterneuerung von embryonalen und mesenchymalen Stammzellen hält [8 ]. Jüngste Studien zeigten, dass NANOG stark erfasst ist schlecht differenzierten Karzinomen und Spätstadium Tumoren [8-10]. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.
