Zusammenfassung
Hintergrund
Probiotische Nahrungsergänzung kann S. mutans (MS) Zahlen reduzieren. Eines seiner vorgeschlagenen Mechanismen ist eine Immunmodulation. Speichel- humanen neutrophilen Peptid 1-3 (HNP1-3) Ebenen zuvor höher sein in kariesfrei als in Karies anfälligen Kindern nachgewiesen worden, was darauf hindeutet, ihre präventive Rolle gegen Karies. Wir wollten mit Probiotika Speichel HNP1-3 Ebenen zwischen einer Interventionsgruppe zu vergleichen und eine Kontrollgruppe.
Methoden
Eine randomisierte doppelblinde klinische Studie durchgeführt wurde. Sechzig Schüler wurden in gleicher Weise für jede Gruppe eine Intervention oder Kontrolle zugewiesen. Die Verwendung eines probiotischen Stamm Lactobacillus paracasei
SD1, hat gezeigt, MS Nummern in Freiwillige zu reduzieren. In unstimulierten Gesamtspeichel wurden HNP1-3 Spiegel durch ELISA getestet, und MS und Laktobazillen wurden durch Kolonie getestet an der Basislinie Zählen (T0) und bei 3 (T3), 6 (T6) und 12 Monaten (T12). Die Internationale Caries Erkennung und Bewertungssystem wurde verwendet, Karies Status zu beurteilen.
Ergebnisse in der Interventionsgruppe
, Speichel HNP1-3 Ebenen waren signifikant höher als die in der Kontrollgruppe bei T3 und T6 (p & lt
; 0,001), während wurden MS zählt signifikant verringert (p
& lt; 0,01). In der Interventionsgruppe, positive und negative Korrelationen zwischen HNP1-3 Ebenen und Laktobazillen und zwischen MS und Laktobazillen bzw. gefunden. Jedoch gab es keine signifikante Korrelation zwischen verbesserten HNP1-3 Ebenen und vermindert MS Zahlen. Die Karies erhöhen für die Grube und Fissur Oberfläche, nicht aber für den glatten Oberflächen, wurde deutlich zurückgegangen in der Interventionsgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe (p
= 0,01).
Schlussfolgerungen
Probiotika können vorübergehend Speichel verbessern HNP1-3 Ebenen; . Aber ihre Wirkung neue Grube und Fissurenkaries zu reduzieren wahrscheinlich Mikrobielle Interaktionen beinhaltet
Test Anmeldung
TCTR20130904001. (Anmeldeschluss: 4. September 2013)
Schlüsselwörter Alpha-Defensine Zahnkaries S. mutans Probiotika Saliva elektronische ergänzendes Material
die Online-Version dieses Artikels (doi:. 10 1186 /s12903-015-0003-0) enthält zusätzliches Material, das autorisierten Benutzern zur Verfügung
Hintergrund
Zahnkaries. ist eine der häufigsten Erkrankungen bei Kindern und Erwachsenen weltweit [1]. Allerdings hat der Erfolg aller Kariespräventionsprogramme durch seine multifaktorielle Natur behindert. Die Krankheit ist das Ergebnis einer Entmineralisierung, durch die Wechselwirkungen von kariogenen Bakterien verursacht werden, eine Ernährung, die reich an fermentierbaren Kohlenhydraten und Wirts Komponenten wie Zahn und Speichel Eigenschaften [2]. Obwohl viele Bakterienarten eine Rolle bei der Kariesprozess spielen können [3], S. mutans (MS) wurden mit der frühen Karies Entwicklung verbunden wichtigsten Erreger angesehen [4]. Die wichtigsten Virulenz Eigenschaften von MS sind acidogenicity, Säuretoleranz, die Biofilmbildung und Zahn Haftung [5]. Starke Assoziation zwischen MS Mengen und der Pathogenese von Karies wird von mehreren früheren Studien gezeigt, überprüft in [6].
Probiotische Verwaltung wird eine mögliche Strategie betrachtet zur Verbesserung oder oralen Gesundheit. Nach Angaben der Weltgesundheitsorganisation (WHO), sind Probiotika "lebende Mikroorganismen, die, wenn sie in ausreichenden Mengen verabreicht, einen Nutzen für die Gesundheit auf dem Host verleihen" [7]. Verschiedene Mechanismen wurden für die probiotische Wirkung, einschließlich der Produktion von antimikrobiellen Substanzen, Wettbewerb mit Krankheitserregern durch die Verhinderung der zellulären Adhäsion und Invasion und Modulation der lokalen und systemischen Immunfunktionen [8-11] vorgeschlagen. In einer aktuellen systematischen Überprüfung [12] wurden mehrere klinische Studien, die Kapazität von probiotischen Nahrungsergänzung gezeigt MS zählt zu reduzieren, aber die abnehmende Wirkung ist variabel und von kurzer Dauer. Außerdem wurden nur sehr wenige Studien bisher die Mengen der Lactobazillen (LB) und die Verhinderung des Auftretens neuer Karies durch probiotische Supplementierung sucht.
Obwohl LB, die gemeinhin als Probiotika verwendet werden, haben mit Karies Progression [13] in Verbindung gebracht worden, ein kürzlich durchgeführte Studie hat ergeben, dass nur eine bestimmte Spezies, dh
, Lactobacillus salivarius
, mehr bezogen ist auf Karies Entwicklung durch seine Fähigkeit, ein hohes Maß an Säuren zu produzieren [14]. Im Gegensatz zu diesen kariogenen Bakterien,
Lactobacillus paracasei isoliert von kariesfreien Probanden besitzt eine Fähigkeit, MS Wachstum zu unterdrücken [15,16]. In dieser Studie SD1
Lactobacillus paracasei als ein probiotischer Stamm eingeführt und in der Mundhöhle aufgrund seiner mehreren zuvor demonstriert Eigenschaften, einschließlich der Hemmung der MS Wachstums weniger Säureproduktion als andere LB und gute Haftung an orale epitheliale verwendet Zellen [17].
humanen neutrophilen Peptide 1-3 (HNP1-3) sind kleine kationische antimikrobielle Peptide, die die erste Linie der Verteidigung des Wirts gegen ein breites Spektrum von Mikroorganismen [18] zur Verfügung stellen. HNP1-3 sind in duktalen Epithelzellen submandibular Speicheldrüsen und abgesondert in den Speichel [19] zum Ausdruck gebracht. Sie werden auch von Neutrophilen und Freigabe in Zahnfleischtaschenflüssigkeit [20] hergestellt. Die präventive Rolle der HNP1-3 gegen Karies durch den deutlich höheren Speichel HNP1-3 Ebenen in kariesfreien Kinder als in jenen erleben Karies nachgewiesen durch Tao et al vorgeschlagen worden. [19]. Da einer der probiotischen Mechanismen hat mit Wirtsimmunregulation beteiligt werden vorgeschlagen, wir die Hypothese daher, dass probiotische Ergänzung durch Augmentation Karies durch eine verstärkte Produktion von Speichel HNP1-3 der lokalen Wirtsimmunität verhindern helfen könnte. Die Ziele dieser Studie waren die Auswirkungen von probiotischen Intervention auf Speichel HNP1-3 Ebenen, MS zählt, und LB zählt zu untersuchen und die Korrelationen zwischen diesen Host und mikrobielle Parameter zu bestimmen. Darüber hinaus werden neue Vorkommen von kariösen Läsionen für die zweiten Molaren während einer 12-monatigen klinischen Studie wurden zwischen den Kontroll- und Interventionsgruppen bewertet und verglichen.
Methoden
Überblick über Studiendesign
Dieser Versuch als entworfen wurde, randomisierten, doppelblinden und placebokontrollierten Verfahren mit zwei parallelen Gruppen. Das Studienprotokoll wurde von der Human Experimentation Ausschüsse der Fakultäten für Zahnmedizin, Universität von Chiang Mai und Prince of Songkla University, Thailand genehmigt. Eine Einverständniserklärung wurde von den Eltern oder Erziehungsberechtigten jedes Teilnehmers vor dem Beginn dieser Studie erhalten. Sechzig qualifizierten und gesunden Teilnehmern aus 246 Kinder wurden in gleicher Weise auf eine der beiden Gruppen zugeteilt, die Kontrolle und probiotischen Gruppen, eine einfache Randomisierung Verfahren durch Verwendung von Losen (Abbildung 1) zu ziehen. Die Ein- und Ausschlusskriterien sind in Teilnehmer und ist in Abbildung 1. Für die Doppelblind-Verfahren wurde der Code von einem unabhängigen Monitor gehalten. Dieser Code wurde nicht enthüllt, bis alle Daten hatte analysiert. Keiner der Forscher, die Ärzte, die Teilnehmer, die Lehrer oder die Statistiker wusste, ob die Kinder Kontrolle oder Intervention Milch über den gesamten Verlauf dieser Studie erhielten. Die Studie wurde am http registriert: //www. Clinicaltrials in th /, einer der primären WHO Registry Networks, Clinical Trials Kennung TCTR20130904001... Die gesamte Versuchsdauer betrug 12 Monate, und das Ergebnis Messung dieser Studie bestand aus vier Parametern: Speichel HNP1-3, MS und LB Ebenen in vier verschiedenen Zeitpunkten: T0 (Baseline), T3 (drei Monate der Intervention), T6 (sechs Monate Interventions) und T12 (sechs Monate nach Beendigung des Eingriffs), und das Vorhandensein von kariösen Läsionen oder entmineralisiertes bei T0 und T12 (Abbildung 1). Die priori
Probengröße Berechnung wurde mit einem Fokus auf mittlere Unterschiede von MS zählt zwischen zwei unabhängigen Gruppen mit G Power-Software [21], mit dem Effekt, Größe gleich 0,8 bei 5% statistische Signifikanzniveau und 90% Leistung der Test durchgeführt . Die Berechnung ergab nicht weniger als 28 Teilnehmer in jeder Gruppe. Abbildung 1 A Gemahl Flussdiagramm die Anzahl der Teilnehmer in der Steuer- und probiotischen Gruppen zu Beginn und zum Abschluss der Studie zeigt. Von 246 in dieser Studie teilnehmenden Kinder, 60 Teilnehmer blieben berechtigt aufgrund der Ein- und Ausschlusskriterien. Sechzig Teilnehmer wurden in gleicher Weise für zugeteilt entweder die Kontrolle oder die probiotischen Gruppe durch einfache Randomisierung in den Methoden beschrieben. Die Teilnehmer Milchpulver erhalten mit oder ohne Probiotika während der ersten sechs Monate Intervention und Speichelproben wurden für Analysen von HNP1-3 Ebenen gesammelt, MS und LB zählt zu vier verschiedenen Zeitpunkten: T0, T3, T6 und T12. Mündliche Prüfung zur Beurteilung der ICDAS Scores wurde bei T0 und T12.
Herstellung von Milchpulver mit Probiotika
die probiotischen Stamm Lactobacillus paracasei
SD1, wurde isoliert von kariesfreien Freiwilligen und wurde zuvor gezeigt, ergänzt durchgeführt die maximale hemmende Wirkung auf Streptococcus mutans in vitro
[17] auszuüben. Der Bakterienstamm wurde durch PCR-RFLP der 16S-ribosomalen RNA-Gens und Natrium-Dodecyl-Polyacrylamid-Gelelektrophorese [22] identifiziert. Die probiotischen Intervention wurde in eine Form von Milchpulver durch die Sprühtrocknungstechnik hergestellt. Die Kulturbedingungen und die Technik der Sprühtrocknung wurden wie zuvor beschrieben durchgeführt [23]. Kurz gesagt, wurde mit in einer Mischung aus 1% Probiotika und einem 3-Liter-Menge an wärmebehandelt (50 ° C für 30 min) und 20% rekonstituierter Magermilch, und dann sprühgetrocknet eine Kultur von Lactobacillus paracasei
SD1 inokuliert ein Sprühtrockner (Modell B191 Büchi Mini-Sprühtrockner, Flawil, Schweiz). Das Endprodukt war gelblich weißes Pulver mit einem Feuchtigkeitsgehalt von 3,44 ± 0,85% und Keimzahl von 7,5 ± 0.20x10
8 cfu /g, die bei 4 ° C gelagert wurde. Die Lebensfähigkeit von Lactobacillus paracasei
SD1 in der beimpft Milchpulver wurde zuvor in einer sechsmonatigen Studie bewertet durch ihr Wachstum in dreifacher Ausfertigung Man Rogosa- Prüfung und Sharpe (MRS) Platten gießen unter anaeroben Inkubation für drei Tage bei 37 ° C [23 ]. Es wurde gezeigt, daß die maximale Überlebensrate von Lactobacillus paracasei
SD1 in dem Magermilchpulver 99% war, wenn das Milchpulver bei 4 ° C für sechs Monate [23] gespeichert wurde. Allerdings sank die Überlebensrate deutlich, wenn das Milchpulver bei 25 ° C [23] gespeichert wurde. Das Milchpulver im allgemeinen Erscheinungsbild für beide probiotische und Kontrollgruppen sahen identisch, mit Ausnahme der Abwesenheit des probiotischen Stammes in der Kontrollgruppe, und wurde in den gleichen durchsichtige Plastikbeutel mit einem Namen versehen jedes Teilnehmers verpackt. Die Verpackung und Lieferung Schritte wurden von wissenschaftlicher Mitarbeiter durchgeführt, die aus jedem Schritt der Probenahme und Analyse geblendet
Teilnehmer
Die Einschlusskriterien waren:. (I) eine gute Mundgesundheit mit Karies in zwei oder weniger Zähne (ii) Vorhandensein von vier zweiten Molaren im Mund (iii) die Abwesenheit von unbehandelten aktiven tiefen kariösen Läsionen (iv) die Abwesenheit von Parodontitis (v) Nichtraucher und (vi) täglich Zähneputzen Gewohnheit Fluorid-Zahnpasta verwenden. Die Ausschlusskriterien waren Jugendliche mit systemischen Erkrankungen, systemische Antibiotika innerhalb von sechs Wochen, Routine Verbrauch von Probiotika oder Xylit, Allergie gegen Kuhmilch, Laktose-Intoleranz und schwere Nahrungsmittelallergie zu empfangen. Vor dem Beginn der klinischen Studie wurden alle Teilnehmer informiert keine Produkte zu konsumieren Probiotika wie Joghurt, Trinkjoghurt, Käse usw., während der gesamten Dauer dieses Prozesses enthält. Die Teilnehmer in beiden Gruppen wurden angewiesen, täglich in 50 ml Wasser und trinken Sie einmal 5 g Milchpulver zu mischen, außer an den Tagen der Speichelentnahme, für sechs Monate unter der Aufsicht von Lehrern. An den Feiertagen oder am Wochenende, waren alle Kinder informiert ihre Milch zu Hause zu trinken und die leeren Plastiktüten zurückzukehren. Die Compliance wurde von ihren Lehrern überprüft, die in einem Logbuch täglich gefüllt mit Informationen über den Schulbesuch von Kindern und auf, ob die Kinder hatten die Milch getrunken. Es war offensichtlich, dass keine Kinder in dieser Studie teilnehmenden während der ersten sechs Monate Intervention wegen Kranken aus ihren Klassen abwesend waren. Alle Teilnehmer wurden gebeten, sofort Nebenwirkungen berichten.
Analysen von Speichel HNP1-3 Ebenen
Eine 2-ml-Menge von nicht-stimulierten ganze Speichel gesammelt und gleichmäßig in zwei Aliquots aufgeteilt, eine für die Analyse von HNP1-3 Ebenen und die andere für die Analyse von mikrobiologischen Ebenen. Das erste Aliquot wurde mit Nonidet P-40 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) bis zu einer Endkonzentration von 0,1% (v /v) gegeben, bei 4 ° C für 10 min bei 15.000 rpm zentrifugiert, [19] und der geklärte Überstand wurde gesammelt und eingefroren für die weitere Analyse von HNP1-3 Ebenen durch einen HNP1-3 ELISA-Kit (Hycult Biotechnology, Uden, Niederlande) gemäß den Anweisungen des Herstellers gespeichert. Kurz gesagt, verdünnte Speichelproben (1: 200) wurden zu einer vorbeschichteten Platte in dreifacher Ausführung mit dem spezifischen primären Antikörpers an HNP1-3 aufgetragen und für 1 h bei Raumtemperatur inkubiert. Für eine negative Kontrolle wurde Verdünnungspuffer ohne Zusatz der Speichelproben wurde auf die vorbeschichteten Platte gegeben. Nach viermaligem Waschen mit Waschpuffer wurde jede Vertiefung mit dem biotinylierten Tracer-Antikörper für 1 h bei Raumtemperatur inkubiert. Dann wurde die Streptavidin-Peroxidase-Konjugat zugefügt und für 1 h inkubiert. Danach, 3,3 ', 5,5'-Tetramethylbenzidin, ein chromogenes Substrat, wurde für 20 min zugegeben, und die Reaktion wurde dann durch die Zugabe von 2% Oxalsäure gestoppt. Die Konzentrationen von HNP1-3 in Speichelproben wurden aus einer Standardkurve, die durch verschiedene bekannte Konzentrationen eines HNP1-3 Standard etabliert, berechnet als ELISA Systemsteuerung verwendet. Die Konzentrationen von Speichel HNP1-3 wurden dann durch ihre Gesamtproteingehalt eines BCA-Protein-Assay (Pierce Inc., Rockford, IL) gemäß den Anweisungen des Herstellers.
Mikrobiologische Tests
Die Mengen von Speichel-MS und LB normalisiert mit wurden durch eine typische Kolonie Zählverfahren bei T0, T3, T6 und T12 ausgewertet. Das zweite Aliquot von Speichelproben wurde zehnfach verdünnt 1:10 bis 1: 10.000. Jede Verdünnung (10 ul) wurde auf die selektive Agarplatten fallen gelassen, Mitis Salivarius Bacitracin (MSB) Agar für MS (Difco Laboratories, Detroit, MI) und MRS-Agar für die LB (Difco Laboratories). Die Bedingungen für die Inkubation anaerobe waren, 10% H 2, 10% CO 2 und 80% N 2 bei 37 ° C für 48 h. Die Koloniezählung wurde unter einem Mikroskop doppelt durchgeführt.
Internationale Caries Detection and Assessment System (ICDAS)
Am Anfang und am Ende der Studie (T0 und T12) wurden alle Teilnehmer für die Mundgesundheit geprüft und Zahn Kariesstatus von zwei erfahrenen Zahnärzte (SP und ST) mit der Cohens kappa-Werte 0,85 und 0,82 für die intra- und inter Prüfer Kalibrierungen sind. Die Untersuchung wurde unter Verwendung eines Mundspiegel und eine Luftspritze unter einem Betriebslicht durchgeführt. Die Kariesdaten für jede Zahnoberfläche, einschließlich Okklusion (Grube und Fissur) und glatte Oberfläche (buccal, lingual, mesial und distal) Karies, wurden nach den Kriterien der International Caries Detection and Assessment System (ICDAS) aufgenommen [24]. Die ICDAS Codes bestehen aus: 0 = Ton, 1 = erste sichtbare Veränderung in Schmelz, 2 = deutliche optische Veränderung in Schmelz, 3 = lokalisierte Schmelz Abbau, 4 = underlying Dentin Schatten, 5 = deutliche Hohlraum mit sichtbaren Dentin und 6 = umfangreiche Hohlraum innerhalb sichtbar Dentin. Caries Risikobewertung in dieser Studie wurde zuvor von Nase und Mitarbeiter [25], die sowohl umfassen Status und MS Mengen klinische Karies wie folgt beschrieben durch die modifizierten Kriterien bestimmt. Die "high risk" Teilnehmer wurden als sowohl eine ICDAS Score & gt definiert; 0 und MS Ebenen ≥10 5 KBE /ml, während die "moderate risk" diejenigen, hatte entweder ein ICDAS score & gt; 0 oder MS Ebenen ≥10 5 KBE /ml und die "low risk" Einsen hatte eine ICDAS Score = 0 und MS Ebenen & lt; 10 5 KbE /ml
Statistische Analysen
der Mann-Whitney U
. Test wurde verwendet, zwischen den Gruppen Unterschiede in Speichel HNP1-3 Ebenen zu analysieren. Unterschiede in Speichel HNP1-3 Niveaus unter vier verschiedenen Perioden in jeder Gruppe wurden durch den Kruskal-Wallis-Test analysiert, gefolgt von den Mann-Whitney U-Test
. Die Anzahl der Koloniezahlen für MS und dass für LB wurden von der unabhängigen Probe als log KBE /ml und analysiert präsentiert t
-test. Korrelationen zwischen jedem Paar der Daten von HNP1-3 Ebenen, MS und LB Zählwerte in jeder Gruppe wurden durch die Pearson-Korrelationstest getestet. Regressionsanalyse wurde für die signifikanten Korrelationsdaten durchgeführt. Eine Odds Ratio (OR) für Karieszuwachs wurde durch Kreuztabelle berechnet. Das Software-Paket verwendet wurde, war das Statistische Paket für Sozialwissenschaften (SPSS Version 17.0 Inc., Chicago, IL), und die Unterschiede wurden als signifikant angesehen, wenn p
-Werten waren weniger als 0,05. . Alle diese statistischen Methoden, die von einem biostatistician durchgeführt wurden (TS)
Ergebnisse
Demographische Daten
insgesamt 60 Teilnehmer (Alter reicht von 13 bis 15 Jahren; n
= 26 für Männer und 34 für Frauen) abgeschlossen dieses 12-monatigen klinischen Studie (Abbildung 1). Keine negativen Nebenwirkungen von Probiotika oder Milchpulver Aufnahme in dieser Kohorte wurden berichtet. Die Compliance für den täglichen Konsum von Milchpulver in beiden Gruppen wurde sorgfältig unter der Aufsicht von Lehrern überwacht und auch in der ersten sechsmonatigen Interventionsperiode gesteuert. Die Bewertung für die Kariesrisiko ergab, dass der Prozentsatz der Teilnehmer des "hohes Risiko" eingestuft, der "moderate risk" und "low risk" Gruppen waren 50, 31,7 und 18,3, beziehungsweise. Obwohl die randomisierten Verfahren durchgeführt wurde, um alle 60 in Frage kommenden Teilnehmer an die Steuerung oder probiotischen Gruppe zu ermitteln, wurde übereinstimmend, dass die Prozentsätze von hoher, mittlerer und geringer Kariesrisiko bei der Kontrolle gegenüber der probiotischen Gruppe fast gleich waren wie folgt: 50,0 im Vergleich zu 50,0, 33,3 im Vergleich zu 30,0 und 16,7 im Vergleich zu 20,0, beziehungsweise. HNP1-3 Ebenen in der probiotischen Gruppe
der Median Speichel HNP1-3 Ebenen, ausgedrückt in der Einheit & mgr; g /mg Gesamtproteine, in der probiotischen Raised Speichel
Gruppe waren signifikant höher als in der Kontrollgruppe bei T3 (1,0250 gegenüber 0,5145 ug /mg; p
& lt; 0,001) und T6 (1,1470 gegenüber 0,5415 ug /mg; p
& lt; 0,001), aber nicht auf T0 oder T12 (Abbildung 2). Im Hinblick auf die Kinetik der Speichel HNP1-3 Ebenen in der probiotischen Gruppe während der 12-monatigen Laufzeit dieser klinischen Studie wurde gezeigt, dass die HNP1-3 Spiegel während der sechsmonatigen Interventionszeitraum vorübergehend erhöht wurden (Abbildung 2). In anderen Worten, diese Niveaus bei T3 und T6 (p
& lt; 0,001) signifikant erhöhte und verringerte sich nach und nach bei T12. Jedoch keine signifikanten Veränderungen der Speichel HNP1-3 Ebenen in der Kontrollgruppe an vier Zeitpunkten (T0, T3, T6 und T12) beobachtet (Abbildung 2). Abbildung 2 Wesentliche aber vorübergehender Anstieg der Speichel humanen neutrophilen Peptid (HNP) 1-3 Stufen von probiotischen Nahrungsergänzung. Die y-Achse
von Box-Plot Graph zeigt Speichel HNP1-3 Niveaus von Gesamtproteinkonzentration in der Einheit & mgr; g /mg für die Kontrolle (leere Kästchen) normalisiert und die probiotischen (graue Kästen) Gruppen aus vier verschiedenen Epochen der Speichel Sammlung: T0, T3, T6 und T12. * = P
& lt; 0,05; *** = P
& lt; 0,001. Die durchgezogenen Linien die wesentlichen Unterschiede zwischen beiden Gruppen zeigen, während die gepunkteten Linien die wesentlichen Unterschiede innerhalb der probiotischen Gruppe darstellen.
Verminderte MS zählt im Gegensatz LB zählt durch probiotische Intervention
Die mittleren Zählungen und Standardfehler für Speichel zu einer erhöhten MS und LB (log cfu /ml) bei T0, T3, T6 und T12 in der Steuer- und probiotischen Gruppen werden in einem linearen Diagramm (Figur 3) gezeigt. Zu Beginn der Studie (T0) wurde gezeigt, dass die mittlere Speichel LB Zählung in der probiotischen Gruppe (eine durchgezogene Linie) war nicht signifikant verschieden von der in der Kontrollgruppe (eine gestrichelte Linie), während die mittlere Speichel MS in der probiotischen Gruppe zählen signifikant höher war als in der Kontrollgruppe (p
& lt; 0,05; Fig 3). Jedoch bei T3 und T6, eine signifikante Reduktion der MS zählt in der probiotischen Gruppe war deutlich zu erkennen, im Vergleich mit denjenigen in der Kontrollgruppe (T3 = p
& lt; 0,001 und T6 = p
& lt; 0,01), während ein signifikanter Anstieg in LB Zählwerte anstelle beobachtet (p
& lt; 0,05; Fig 3). Im Gegensatz zu der probiotischen Gruppe keine wesentlichen Veränderungen in den mittleren Zählungen für Speichel MS und LB wurden in der Kontrollgruppe (gestrichelte Linien in Abbildung 3). Bei T12, zählen der Mittelwert für Speichel MS in der probiotischen Gruppe erhöht wurde und kehrte fast bis zur Grundlinie, während der Mittelwert für Speichel LB in der probiotischen Gruppe zählen war immer noch deutlich höher als in der Kontrollgruppe (p
& lt; 0,01; Figur 3), die Fähigkeit der LB darauf hindeutet, in der Mundhöhle trotz Beendigung des probiotischen Intervention sechs Monate lang aufbewahrt werden. Abbildung 3 Wesentliche aber vorübergehende Verringerung der Speichel S. mutans (MS) zählt durch probiotische Intervention. Die lineare Graph bedeutet zeigt Grafen von MS log (offene Kreise) und jene von Laktobazillen (LB; schwarze Kreise) in der Einheit von KBE /ml (y
-Achse) sowohl probiotische (durchgezogene Linien) und Kontrolle (gestrichelte Linien ) Gruppen aus vier verschiedenen Epochen der Speichelentnahme (x
-Achse): T0, T3, T6 und T12. * = P
& lt; 0,05; ** = P
& lt; 0,01; *** = P
& lt; 0,001. Fehlerbalken stellen die Standardfehler (SE). Die Werte der mittleren log MS und LB zählt und (SE) sind in den festen Boxen für die probiotischen Gruppe und in den gepunkteten Boxen für die Kontrollgruppe in jeder Periode von Speichel Sammlung gezeigt.
Deutliche Verringerung der Karies in die Zuwachs Grube und Fissur Oberfläche in der probiotischen Gruppe, die Anteile von Ton (ICDAS Score = 0) und unsolide Flächen (ICDAS Partituren = 1-6) aus allen fünf Zahnoberflächen, einschließlich Grube und Fissur, mesial, distal, bukkal, und lingual, bei T0 und T12 in sowohl Steuer- und probiotischen Gruppen als gestapelte Balken auf insgesamt 100% (4A) veranschaulicht. Es war offensichtlich, dass die Prozentsätze der kariösen Läsionen in den zweiten Molaren in sowohl Steuerung als auch probiotische Gruppen in fast allen Zahnoberflächen während dieser 12-monatigen Studie und dass die Grube und Fissurenkaries in beiden Gruppen war in unserer Kohorte häufiger erhöht als war Karies in den anderen vier glatten Oberflächen, einschließlich mesial, distal, bukkal und lingual (4A). Summe der Prozentsätze der Karies erhöhen für alle fünf Zahnoberflächen, einschließlich der Grube und Fissur Oberfläche und vier glatten Oberflächen und vier glatten Oberflächen in der probiotischen Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe waren 25,5 im Vergleich zu 44,2 und 15,2 im Vergleich zu 21,4 bzw. (4B ). Die Prozentsätze von Karies inkrementieren nur in der Grube und Fissur Oberfläche waren 10,3 gegenüber 22,8 (4B). Interessanterweise ist der Anteil der neuen caries Auftreten für alle fünf Zahnflächen (OR = 1,605, 95% CI 1,007 bis 2,557; p = 0,045
) und für die Grube und Fissur Oberfläche (OR = 2,582, 95% CI 1,235-5,400 ; p
= 0,01) war in der probiotischen Gruppe signifikant niedriger als in der Kontrollgruppe, während es zwischen zwei Gruppen für die vier glatten Oberflächen (OR = 1,506 kein signifikanter Unterschied in der neuen Karies Auftreten war, 95% CI 0.726- 3,126; p = 0,269
). Abbildung 4 Deutlicher Rückgang des Anteils der Karies erhöhen für die Grube und Fissur Oberfläche, nicht aber für den glatten Oberflächen, durch probiotische Intervention. (A) Die 100% gestapelte Balken zeigen den Anteil der Schall (weißer Bereich; ICDAS Score = 0) und unsolide (gefüllte Flächen; ICDAS Partituren = 1-6) Oberflächen aus allen fünf Zahnoberflächen, einschließlich Grube und Fissur, mesial, distal , buccal, lingual und, in der Kontrolle (oberes Feld) und die probiotischen (unteres Feld) -Gruppen. Hinweis höhere prozentuale Anteile an ungesunden Oberflächen in der Grube und Fissur Oberfläche als die in den anderen vier Oberflächen. (B) Das Balkendiagramm zeigt deutliche Reduzierung der Anteile von Karies in der probiotischen Gruppe erhöhen für eine Kombination aller fünf Zahnoberflächen und für die Grube und Fissur Oberfläche allein, aber nicht für die kombinierten vier glatten Oberflächen, einschließlich mesial, distal, bukkalen und lingualen Oberflächen. * = P
& lt; 0,05; ** = P = 0,01
.
Mangel an Korrelation zwischen erhöhten HNP1-3 und verringerte Anzahl von MS
Korrelationen zwischen jedem Paar von Speichel HNP1-3 Ebenen in pg /mg Gesamtprotein, MS Zählungen und LB zählt in log KBE /ml in sowohl Steuerung als auch probiotische Gruppen durch die Pearson-Korrelation Test ermittelt wurden (zusätzliche Datei 1 für die Daten der einzelnen Parameter sehen), und es zeigte sich, dass eine signifikante Korrelation zwischen diesen Parametern nur in die gefunden wurden probiotischen Gruppe, aber nicht in der Kontrollgruppe (Abbildung 5). y
= 0.653x
: (; p
& lt;; 0,001 5B r
= 0,376) mit der Gleichung aus der Regressionsanalyse Insbesondere Speichel HNP1-3 Spiegel wurden positiv mit LB zählt korreliert + 5,929, wobei y
die Log-LB Zahl und x
ist der HNP1-3 Ebene, während LB zählt invers mit MS zählt (r
= -0,282 verbunden waren; p
= 0,002; Figur 5F). Dennoch wurde keine signifikante Korrelation zwischen der Speichel bemerkt HNP1-3 Ebenen und MS zählt in der probiotischen Gruppe (5D), was darauf hindeutet, dass eine verstärkte Speichel HNP1-3 Ebenen durch die probiotischen Intervention nicht mit einer verminderten MS Mengen. Abbildung 5 Positive und negative Korrelationen zwischen Speichel humanen neutrophilen Peptid (HNP) 1-3 Ebenen und melden Sie zählt von Laktobazillen (LB) und zwischen log Grafen von S. mutans (MS) und die der LB jeweils in der probiotischen Gruppe. Die Korrelationskoeffizienten (r
) und die Signifikanzniveaus (p
-Werten) zwischen jedem Paar von drei Parametern, einschließlich HNP1-3 Ebenen in & mgr; g /mg, zählt LB in log KBE /ml und MS zählt in log cfu /ml wurden für beide Steuer (A, C und E) und probiotische (B, D und F) Gruppen bestimmt und dargestellt. Die Regressionsanalyse nur für die signifikante Korrelation zwischen erhöhten HNP1-3 Ebenen bestimmt werden konnte, und erhöht LB zählt in B, und eine Regressionslinie wurde mit der folgenden Gleichung erstellt: y = 0.653x
+ 5,929; p
= 0,003
Diskussion
Die wichtigsten Ergebnisse aus dieser Studie sind: (a) eine signifikante, aber vorübergehende Erhöhung der Speichel HNP1-3 Niveaus bei T3 und T6 in der probiotischen Gruppe. (B) ein signifikanter Anstieg in LB gilt als in MS zu einer vorübergehenden Abnahme Gegensatz zählt während probiotische Intervention; (C) positive und negative Korrelationen zwischen HNP1-3 Ebenen und LB zählt und zwischen LB zählt und MS zählt jeweils in der probiotischen Gruppe; und (d) eine signifikante Reduktion der Karies erhöhen für die Grube und Fissur Oberfläche, nicht für die glatten Oberflächen. Unter diesen vier wichtigsten Erkenntnisse, die signifikante Erhöhung der Speichel HNP1-3 Niveaus von probiotischen Nahrungsergänzung während der sechsmonatigen Interventionszeitraum ist von großem Interesse, da es wahrscheinlich ist, dass Lactobacillus paracasei
SD1 kann einen immunstimulatorischen Effekt, der durch eine verstärkte Produktion von angeborenen ausüben Immuneffektoren, insbesondere HNP1-3 von duktalen Epithelzellen submandibular Speicheldrüsen [19], die dann in den Speichel sezerniert. Die mögliche immunstimulatorischen Wirkung von Lactobacillus paracasei
SD1 rechtfertigt weitere Untersuchungen. Darüber hinaus ist die angeborene Immunaktivierung von Lactobacillus paracasei
SD1 mit der signifikante Korrelation zwischen erhöhten Speichel HNP1-3 Ebenen erhärtet und erhöhte LB Zählwerte in 5B zu sehen. Aktivierung der Wirtsimmunität, insbesondere eine erhöhte Produktion von sekretorischen Immunglobulin A (sIgA), wurde zuvor für Probiotika in den Gastrointestinaltrakt [26-28] und in der Mundhöhle einer der Hauptmechanismen gezeigt werden [29-31]. In dieser Studie zu untersuchen, die Gründe nur die Speichel HNP1-3 Spiegel während der probiotischen Intervention wurde aus einem einzigen früheren Studie basiert auf der Beobachtung, die signifikant höher HNP1-3 Niveaus in den Speichelproben von kariesfreien Kinder als die von karies demonstriert anfälligen Kinder [19]. Jedoch ist es notwendig, die Speichelspiegel anderer Immun-Effektor-Moleküle, insbesondere andere antimikrobielle Peptide außer HNP1-3, in einem zukünftigen Studie weiter zu bestimmen. Es wird darauf hingewiesen, dass die Ebenen der Speichel HNP1-3 in unserer Kohorte detektiert den von der gleichen ELISA-Verfahren von Tao et al [19] durchgeführt, gemessen vergleichbar waren. Interessanterweise wurden die HNP1-3 Spiegel während der sechsmonatigen Interventionszeitraum vorübergehend erhöht und sank allmählich auf die Ausgangswerte nach Absetzen der probiotische Aufnahme. Die vorübergehende Induktion von HNP1-3 Ebenen war im Einklang mit der transienten Induktion von sIgA Spiegel im Speichel durch probiotische Aufnahme [30], was darauf hinweist, dass der tägliche Verzehr von Probiotika für eine nachhaltige Steigerung der Wirtsimmunantworten erforderlich zu sein scheint.
Trotzdem die erhöhten Speichel HNP1-3 Niveaus nicht signifikant mit den verringerten MS Zählwerte korrelieren, aber die LB-Zählungen wurden stattdessen mit der MS korreliert invers zählt, was vermuten lässt, dass der Mechanismus für probiotische Wirkung in der Mundhöhle wahrscheinlich den Wettbewerb verbunden sein können und /oder die Wechselwirkung zwischen zwei verschiedenen Mikroorganismen, wie zuvor von Teanpaisan und Piwat [22] eher als eine verstärkte Produktion von HNP1-3 gezeigt.
