Zusammenfassung
Hintergrund
Candida albicans
ist eine diploide Hefe, die in einigen Umstände können oral oder oropharyngeal Infektionen verursachen. Diese Untersuchung soll die Prävalenz von Candida spp
zu studieren. und die ABC-Genotypen von 76 klinischen Isolaten von C. albicans zu analysieren
aus der Mundhöhle von Nierentransplantationspatienten aus zwei verschiedenen geografischen Regionen von Brasilien erhalten.
Methoden kaufen Wir getippt 48 Stämme mit ABC-Genotypisierung und Microsatelitte unter Verwendung von Primer M13 und getestet drei Virulenzfaktoren in vitro:. Phospholipaseaktivität, Morphogenese und die Fähigkeit, von polymorphkernigen Neutrophilen Phagozytose zu entziehen
Ergebnisse
C. albicans
war die häufigsten Arten (86,4%), gefolgt von C. tropicalis
(4,5%). C. albicans
Genotyp A war die häufigste (58 Isolate; 76,4%), gefolgt von Genotyp C (15 Isolate; 19,7%) und Genotyp B (3-Isolate; 3,9%). Wenn Mikrosatelliten-Technik mit dem Primer M13 angelegt wurde, 80% der Isolate aus dem Süden wurden in derselben Gruppe gestellt. Die Mehrheit der Genotype C-Stämme wurden zusammengefasst in zwei verschiedenen Clustern. Genotype C wurde resistenter gegen PMN Angriff betrachtet als Genotypen A und B-Stämme aus dem Süden von Brasilien isoliert zeigte auch eine bessere Fähigkeit, PMN Phagozytose zu bekämpfen.
Schlussfolgerungen
Wir haben eine hohe Rate von C. albicans gefunden
Genotyp C Stämmen aus der Mundhöhle dieser Gruppe von Patienten isoliert. Diese Studie charakterisiert oralen C. albicans
Stämme von Nierentransplantatempfängern isoliert und wird zu einem besseren Verständnis der Pathogenese der orale Candidiasis beitragen.
Schlüsselwörter Candida
spp Empfänger Nierentransplantation Mundcandidiasis Genotyping Virulenzfaktoren Elektronische Zusatzmaterial
die Online-Version dieses Artikels (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-20) enthält zusätzliches Material, das autorisierten Benutzern zur Verfügung
Hintergrund
Trotz der Tatsache. dass Candida
spp. gehören der normalen oralen Mikrobiota, leben auf der Zunge, Zahnfleisch, Gaumen und Speichel von gesunden Personen als commensal Hefen, können sie oral oder oropharyngeal Infektionen verursachen [1, 2]. Candida
spp. haben von 40 bis 60% der gesunden Mund, während orale Candidiasis ist häufiger bei immungeschwächten Personen, Personen mit schweren Grunderkrankungen und oberen Prothesenträger [3, 4].
Trotz der Tatsache, dass andere weniger virulente Candida isoliert
Arten wie C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei
und C. dubliniensis
auch aus dem Speichel von Patienten mit oder ohne orale Candidiasis, C. albicans isoliert wurden,
ist immer noch die häufigste Spezies mit oralen Läsionen [5].
Mehrere Faktoren für den Übergang von commensal Hefen zu pathogenen Formen beitragen können, die zu einer Beeinträchtigung der Host Immunsystem im Zusammenhang mit der Virulenz des Mikroorganismus in Zusammenhang stehen. Die wichtigsten Virulenzfaktoren von C. albicans
Knospe-to-Hyphen umfassen Übergang (auch genannt Morphogenese), Adhäsion an menschliche Epithelzellen und Endothelzellen, die Biofilmbildung, die Fähigkeit, hydrolytische Enzyme absondern (hauptsächlich Proteinasen und Phospholipasen), phänotypischen Switching (weiß-opake Übergang) sowie Umgehung der Wirtsimmunzellen [6, 7].
Einige Studien ausgewertet wurden C. albicans
ABC Genotypen aus der Mundhöhle verschiedener Individuen isoliert und die Ergebnisse scheinen sehr zu sein variabel, entsprechend der Population ausgewertet. Zum Beispiel ist eine Studie mit 11 Diabetikern mit Parodontitis ergab, dass 51,6% subgingivalen C. albicans
B gehörte Genotyp isoliert [8], während andere Untersuchung hat Genotyp A gefunden als vorherrschende [9].
Die Prävalenz von orale Candidiasis bei Empfängern Nierentransplantation in der Literatur reicht von 9,4% auf 46,7% beschrieben [10-12]. Eine Studie in Mexiko von De La Rosa-Garcia et al [11], berichtet 18,7% der Fälle von orale Candidiasis in insgesamt 90 Nieren transplantiert Empfänger.
Unsere Gruppe zuvor einen Vergleich einiger Virulenzfaktoren (Biofilm veröffentlicht Produktion, Adhäsion an menschliche bukkale Epithelzellen und Proteinase-Aktivität) unter C. albicans
und nicht-C. Candida albicans
Isolate aus der Mundhöhle von Nierentransplantatempfängern von Natal, Rio Grande do Norte, Brasilien [13] erhalten. Diese Studie ist eine Follow-up dieser früheren Veröffentlichung einschließlich anderer Stämme zu einem anderen geografischen Region Brasiliens gehören. Darüber hinaus wurden andere Virulenz Eigenschaften untersucht. Daher waren die Ziele der vorliegenden Studie Candida
Artenverteilung zu bestimmen und 48 C. albicans
Stämme aus der Mundhöhle von 154 Niere transplantiert Empfänger aus zwei verschiedenen geografischen Regionen Brasiliens (Nordosten und Süden isoliert charakterisieren zu Genotypisch ). Zusätzlich wurden die Stämme phänotypisch für die Fähigkeit gekennzeichnet, die folgenden Virulenzfaktoren in vitro zu exprimieren. Die Sekretion von Phospholipase, den Übergang von Hefezellen Hyphen (Morphogenese) und die Fähigkeit, zu widerstehen, die Phagozytose durch polymorphkernige Neutrophile
Methods
Dehnungen Auswahl
Während einer 3 Monate-Zeitraum, 154 Patienten aus zwei unterschiedlichen geografischen Regionen von Brasilien (111 von Natal, Rio Grande do Norte und 43 von Maringa, Parana) wurden in der klinischen Untersuchung der Mundhöhle unterzogen, Candidiasis Diagnose, die nach den Kriterien für die orale Läsionen bei HIV-Patienten durch die EC-Verrechnungszentrale und der Weltgesundheitsorganisation Einstufungen [14] empfohlen etabliert. Nur Patienten, die in Übereinstimmung mit der lokalen Forschungsethikkommission von The Onofre Lopes University Hospital Teil auf einer Überwachung vertraulichen Studie zu nehmen vereinbart, unter der Nummer 152/07 genehmigt wurden in die Studie eingeschlossen. Die Stämme isoliert von oralen Kolonisation (ohne Symptome) oder während Episoden von orale Candidiasis wurden in dieser Studie ausgewertet. Für die Genotypisierung und Virulenz Studien, wir zufällig 48 klinische Stämme von C. albicans
(38 von Natal, Rio Grande do Norte und 10 von Maringa, Parana) ausgewählt. Alle Isolate sind in Tabelle 1 beschrieben, Die Proben wurden auf YPD Glycerol gelagert (10 g /L Hefeextrakt, 20 g /l Pepton, 20 g /L Dextrose und 3% Glycerin) bei -80 ° C an der Laboratório de Micologia Médica e Molecular, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Brasilien. C. albicans
ATCC90028 und SC5314 wurden in dieser Studie als Referenz strains.Table 1 Demographische Daten von Nierentransplantatempfängern von Natal, RN und Maringa, PR, Brasilien, nach Geschlecht, Alter und Grunderkrankung
Variablen enthalten
Natal (n,%)
Maringa (n,%)
Gesamt (n,%)
Sex
männlich
64 (73,6)
23 (26,4)
87 (100)
Weiblich
47 (70,1)
20 (29,9)
67 (100)
Alter
12-18 Jahre alt
6 (85,7)
1 (14.3)
7 (100)
19-34 Jahre alt
44 (81,5)
10 (18,5)
54 (100)
35-64 Jahre alt
59 (64,8)
32 (35,5)
91 (100)
65 Jahre alt oder mehr
2 (100)
0 (0)
2 (100)
Grunderkrankung
diabetische Nephropathie
8 (66,7)
4 (33,3)
12 (100)
Arterielle Hypertonie
47 (85,4)
8 (14,6)
55 (100)
Glomerulonephritis
23 (76,7)
7 (23,3)
30 (100)
polyzystischen Nierenerkrankungen
6 (66.7)
3 (33,3)
9 (100)
Andere
27 (56.25)
21 (43.75)
48 (100)
Muster und Hefen Identifizierung
Proben mit 2 ml Speichel wurden von allen Patienten gesammelt, durch vorherige Stimulation mit Kaugummis. Bei Läsionen vorhanden waren, wurde eine sterile Tupfer auf der Schleimhautoberfläche der Mundhöhle gerieben. Anschließend wurden 100 & mgr; l der Zellen-Suspensionen wurden auf der Oberfläche von Sabouraud Dextrose Agar (SDA; Oxoid, UK) inokuliert hinzugefügt 300 & mgr; g /ml Chloramphenicol (Park-Davis), durch Drigalsky Schleife. Die Platten wurden 48 h bei 37 ° C inkubiert. Hefe-Kolonien wurden plattiert auf CHROMagar Candida® (CHROMagar Mikrobiologie, Paris, Frankreich) für Reinheit und Screening für verschiedene Farb Kolonien zu überprüfen. Artbestimmung wurde basierend auf den Eigenschaften der mikroskopisch nach der Kultivierung auf cornmeal Agar beobachtet Zellen gegeben Tween 80 sowie Assimilation und Gärungstests und ID32C-System (bioMérieux Marcy l'Etoile, Frankreich), wann immer es notwendig war [15]. Stämme, die zur
Spezies Candida parapsilosis gehör Komplex wurden zuvor mit molekularen Methoden identifiziert [13].
C. albicans
DNA-Extraktion
C. albicans
Zellen wurden über Nacht in YPD flüssigen Medium ( Dextrose 20 g /l, Pepton 20 g /l, Hefeextrakt 10 g /L) bei 30 ° C inkubiert gedreht mit 200 Upm in einem Rotationsschüttler (TE-420, Tecnal ® Piracicaba, Brasilien). DNA wurde mit der PrepMan Ultra-Probenvorbereitung Reagenz (Applied Biosystems, Foster City, CA) extrahiert gemäß den Anweisungen des Herstellers. Genomische DNA-Konzentration und Reinheit wurden mit einem Nanodrop Instrument (Thermo Scientific; Amersham Pharmacia Biotech, Wilmington, DE, USA) überprüft.
Mikrosatelliten-Eingabe PCR und ABC Genotypisierung
Mikrosatelliten-Typisierung wurde durchgeführt unter Verwendung der Primer M13 (5 'GAGGGTGGCGGTTCT --3 ') (IDT), wie zuvor beschrieben [16]. CAINT- L (5'-ATAAGGGAAGTCGGCAAAATAGATCCGTAA-3 ') und CA-INT-R (5'-CCTTGGCTGTGGTTTCGCTAGATAGTAGAT-3') [17]: ABC-Genotypisierung wurde mit den folgenden Primern durchgeführt. Kurz gesagt, wurden 1,0 ul DNA 40 ng /& mgr; l auf ein Endvolumen von 25 & mgr; l bis 29 PCR Master Mix (Promega) zugesetzt. einem Anfangszyklus von 94 ° C für 3 min gefolgt von 30 Zyklen von 1 min bei 94 ° C, 1 min bei 57 ° C, 1 min, gefolgt: Die Proben wurden in einem Thermocycler (Amplitherm TX96, USA) unter Verwendung der folgenden Zyklusparametern amplifiziert bei 72 ° C und einem Endzyklus von 5 min bei 72 ° C. Für Mikrosatelliten-Typisierung, 1,0 ul DNA 40 ng /& mgr; l, 2,5 & mgr; l 10 × PCR-Puffer (100 mM Tris-HCl, pH 8,3, 500 mM KCl, 3,5 mM MgCl
2), 5 & mgr; l dNTPmix (100 mM jedes dNTP), 1,0 & mgr; l von jedem Primer (50 pmol /ul), 0,13 & mgr; l Tween 20 und 1,0 Einheiten von Taq DNA-Polymerase wurden zu einem Endvolumen von 25 ul zugegeben. Fünfundvierzig Amplifikationszyklen wurden unter Verwendung derselben Zyklusparameter zuvor beschrieben durchgeführt, mit der Ausnahme, daß die Annealing-Temperatur betrug 36 ° C für die Mikrosatelliten-Typisierung. PCR-Produkte wurden größen getrennt durch Agarose-Gelelektrophorese, und das Gel wurde gefärbt wurden in einer 0,5 ug /ml Ethidiumbromid-Pufferlösung (TAE).
Computergestützte Mikrosatelliten-Datenanalyse
Gelbilder mit dem GelCompar II analysiert Software, Version 4.5 und BioNumerics (Angewandte Mathematik, Kortrijk, Belgien). Die Ähnlichkeiten zwischen den Profilen wurden mit dem Dice-Koeffizienten berechnet, um die Matrices Ähnlichkeitskoeffizienten zu erzeugen Konstruktionen Dendrogram. Für Profil Clustering wurde die ungewichteten Paar-Gruppenmethode mit arithmetischen Mittel mit einer Toleranz von 2%.
Tests zur Hyphenbildung
eine anfängliche Menge von 10 6 Zellen /ml in YPD + 20% FBS verwendet (Fetal Bovine Serum, Sigma-Aldrich ®, Brasilien) wurde bei 37 ° C inkubiert, mit gyratory bei 200 Upm Schütteln. Nach 3 h Inkubation wurden Proben der Kulturen mit einem gleichen Volumen von 10% igem Formaldehyd gemischt Weiterentwicklung zu verhaften und die mittlere Morphologieindex (MI) wurde bestimmt [18]. Werte nahe 1 zeigen eine Population von kugeligen Hefezellen und Werte nahe an 4 eine Population von echten Hyphenzellen zeigen, mit Werten zwischen 1 und 4 gemischt oder Pseudohyphen Morphologien anzeigt.
Assay
Phospholipase Aktivität Phospholipase wurde durch die geschätzte Eigelb-Agar-Methode [19], mit Inokula hergestellt aus über Nacht NGY (Neopepton (Difco, Detroit, MI) 1 g /l, Glucose 4 g /l und Hefeextrakt 1 g /l) Kulturen standardisiert auf 2 x 10 5 Zellen /ml.
Candida albicans
Abtötung durch Neutrophile polymorphkernige
PMN frisch aus Blutproben eines einzelnen gesunden freiwilligen am Tag des Experiments isoliert [20] wurden in essentiellem Eagle-Minimalmedium suspendiert (Gibco) + 20 mM HEPES, pH 7,2, und standardisierte bis 8 × 10 5 PMN /mL. C. albicans
Zellen über Nacht in NGY gezüchtet gewaschen und bei 5 × 10 6 Hefen /ml in HEPES-gepuffertem Eagles minimal essential-Medium mit einem Zehntel Volumen von frischem menschlichem Plasma. Gleiche Volumina von PMN und Hefe Suspensionen wurden gemischt und bei 37 ° C für 3 h unter Rotation bei 50 rpm inkubiert. Die Phagozytose von C. albicans
innen durch Zählen in dreifacher Ausfertigung, die Anzahl der Hefen errichtet wurden oder befestigt in 100 PMN [21]. Die statistische Analyse
Daten
wurden mit Hilfe der Statistik-Software "GraphPad" analysiert, Version 3.0 . Die Ergebnisse wurden als Mittelwert ± Standardabweichung dargestellt, und die Unterschiede wurden mit dem Mann-Whitney-Test analysiert. Für alle Analysen, P ein Standardwert von 0,05 und das Konfidenzintervall von 95% in Betracht gezogen wurde.
Ergebnisse
Patienten demographischen Daten
Patienten klinischen und demografischen Daten sind in Tabelle 1 zusammengefasst Für beide Regionen, die Mehrheit der Patienten, arterieller Hypertonie als häufigste zugrunde liegenden Krankheit. Darüber hinaus war die häufigste Altersklasse 35 und 64 Jahre alt (Tabelle 1).
Mikrobiologie Profilierung von Candida
spp. in orale Candidiasis
Aus den von Natal erhaltenen Stämme, RN (Nordosten), war es möglich, Hefen zu isolieren, von 70 von 111 Patienten (63,1%), während von Maringa, 12 von 43 (27,5%) Candida
spp positive Kulturen wurden erhalten. Verteilung der Arten für beide Regionen ist in Tabelle 2 C. albicans beschrieben
war die vorherrschende Spezies in beiden Städten zu finden, gefolgt von C. tropicalis
. In nur einem einzigen Patienten von Maringa war es möglich, drei Stämme
Zugehörigkeit zu verschiedenen Candida-Spezies zu isolieren (C. albicans
, C. glabrata
, C. tropicalis
) .Tabelle 2 Verteilung der Arten von Candida spp. isoliert von Mundhöhle von Empfängern Nierentransplantation aus zwei verschiedenen geographischen Regionen von Brasilien: Natal, RN und Maringa, PR
Species
Natal (n,%)
Maringá (n,% )
Gesamt (n,%)
Candida albicans
59 (77,6)
17 (22,4)
76 (100)
Candida dubliniensis
2 (100)
0 (0)
2 (100 )
Candida glabrata
2 (66,7)
1 (33,3)
3 (100)
Candida tropicalis
3 (75)
1 (25)
4 (100)
Candida orthopsilosis
2 (100)
0 (0)
2 (100)
Candida metapsilosis
2 (100)
0 (0)
2 (100)
insgesamt
69 (78,4)
19 (21,6)
88 (100)
Bemerkenswert war nur eine Probe von jedem Patienten gesammelt, mit Ausnahme von drei verschiedenen Patienten aus der südlichen Region von Brasilien. Von Patienten 37, wurde der Stamm 06S aus dem Speichel erhalten, während Stamm 06 L von oralen Läsion. Patient 38 hatte zwei C. albicans
Stämme aus der gleichen Läsion gesammelt, mit zwei klaren unterschiedlichen Phänotypen (10S, glatt und 10R, mit rauen Kolonien). 40 Patienten zeigten zwei verschiedene Läsionen und zwei Stämme wurden erhalten, eine von der Zunge und ein anderer aus dem Zahnfleisch (15 T und 15G bezeichnet) zusätzlich zu einem aus dem Speichel erhaltene Stamm (15S).
ABC Typisierung von Candida albicans
DNA aus alle 76 Stämme von C. albicans
und die Referenzstämme ATCC90028 und SC5314 ABC Eingabe vorgelegt wurde. Genotyps A war die am häufigsten mit 58 Isolate (76,4%), gefolgt von Genotyp C, mit 15 Stämmen (19,27%) und B-Genotyps, mit 3 Isolate (3,9%; Tabelle 3). Der gleiche Trend wurde beobachtet, wenn die aus jeder Region erhaltenen Stämme getrennt analysiert wurden: Im Nordosten von Brasilien, C. albicans
Genotyp A war die am weitesten verbreitete, mit 42 Isolaten (71,2%), gefolgt von Genotype C (n = 14 Isolate; 23,7%) und Genotype B mit 3 Stämme (5,1%). Die höhere Inzidenz von Genotyp A wurde auch im Süden des Landes mit 16 Isolaten (94,1%), gefolgt von Genotyp C (n = 1-Isolat; 5,9%) gefunden. C. albicans
Genotyp B wurde nicht für die Isolate aus dieser Region (Tabelle 3) .Tabelle 3 Patienten in die Studie eingeschlossen erhalten beobachtet, geografische Region ABC Genotypisierung und Virulenz-Attribute von Candida albicans
Zahl isolieren
Klinische Zustand
Procedence
ABC typing
Phospholipase Aktivität PZ (cm)
Morphologie-Index (MI)
Keine von C. albicans Zellen phagozytiert von 100 PMN * (%)
1
Colonization
Natal
B
0,6 ± 0,07
2,46 ± 0,70
134 ± 15,3
2
Colonization
Natal
A
0,55 ± 0,04
3,43 ± 0,77
115 ± 14,6
3
Colonization
Natal
A
0,48 ± 0,06
3,22 ± 0,64
66 ± 7,9
5
Infektion
Natal
C
0,58 ± 0,02
2,23 ± 0,57
98 ± 6,7
6
Colonization
Natal
A
0,53 ± 0,01
2,24 ± 0,51
100 ± 12,5
8
Colonization
Natal
A
0,57 ± 0,04
1,86 ± 0,43
130 ± 19
10 Bei
Infektion
Natal
B
0,56 ± 0,12
2,17 ± 0,62
166 ± 8.4
11
Colonization
Natal
C
0,58 ± 0,08
2,15 ± 0,77
28 ± 3.5
12 Bei
Infektion
Natal
A
0,54 ± 0,02
2,46 ± 0,56
150 ± 11,1
13
Colonization
Natal
C
0,6 ± 0,03
2,17 ± 0,65
126 ± 31,6
17
Colonization
Natal
A
0,52 ± 0,03
3,63 ± 0,63
98 ± 20,2
20
Colonization
Natal
A
0,44 ± 0,01
2,85 ± 0,81
86 ± 21,2
21
Colonization
Natal
A
0,4 ± 0,06
2,78 ± 0,92
114 ± 21,5
23
Colonization
Natal
C
0,53 ± 0,09
2,45 ± 0,67
101 ± 11,4
24 Bei
Infektion
Natal
A
0,51 ± 0,10
3,05 ± 0,74
132 ± 13,9
28 Bei
Infektion
Natal
A
0,55 ± 0,04
2,84 ± 0,80
165 ± 9,5
30
Colonization
Natal
C
0,52 ± 0,04
2,17 ± 0,62
119 ± 20
31
Colonization
Natal
A
0,49 ± 0,03
2,64 ± 0,82
129 ± 15
32
Colonization
Natal
A
0,49 ± 0,12
2,81 ± 0,65
123 ± 13,2
34
Colonization
Natal
A
0,52 ± 0,07
2,36 ± 0,64
156 ± 16,5
37
Colonization
Natal
B
0,57 ± 0,01
3,38 ± 0,80
124 ± 19,1
40 Bei
Infektion
Natal
A
0,51 ± 0,06
3,7 ± 0,56
142 ± 15,9
41
Colonization
Natal
A
0,54 ± 0,03
2,7 ± 0,69
172 ± 21,1
44
Infektion
Natal
A
0,48 ± 0,03
2,8 ± 0,77
176 ± 11,6
46
Colonization
Natal
A
0,46 ± 0,04
2,81 ± 0,77
172 ± 20,1
50
Colonization
Natal
A
0,54 ± 0,04
3,24 ± 0,88
157 ± 36,6
51
Colonization
Natal
A
0,51 ± 0,02
2 ± 0,43
130 ± 19,5
53
Colonization
Natal
C
0,53 ± 0,09
2,79 ± 0,71
132 ± 15,9
54
Colonization
Natal
A
0,47 ± 0,02
1,8 ± 0,40
132 ± 9,2
60
Colonization
Natal
C
0,57 ± 0,03
2,15 ± 0,36
146 ± 9
61
Colonization
Natal
A
0,49 ± 0,01
2,48 ± 0,75
142 ± 9,2
70
Colonization
Natal
C
0,51 ± 0,03
2,99 ± 0,50
140 ± 12,7
72
Colonization
Natal
C
0,46 ± 0,04
2,31 ± 0,61
136 ± 9
82
Colonization
Natal
C
0,55 ± 0,03
3,36 ± 0,93
130 ± 13,2
85
Colonization
Natal
C
0,56 ± 0,04
3,15 ± 0,83
144 ± 9,5
107
Colonization
Natal
C
0,57 ± 0,01
2,39 ± 0,63
156 ± 10,1
06A
Colonization
Maringá
A
0,5 ± 0,02
2,34 ± 0,71
80 ± 17,4
06 L
Infektion
Maringá
A
0,56 ± 0,07
2,94 ± 0,58
75 ± 8,7
10Li
Colonization
Maringá
A
0,55 ± 0,01
2,42 ± 0,70
176 ± 6.1
10S
Colonization
Maringá
A
0,64 ± 0,01
2,54 ± 0,76
105 ± 14,7
12A
Colonization
Maringá
A
0,49 ± 0,02
3,3 ± 0,79
59 ± 16,8
12 L
Infektion
Maringá
A
0,51 ± 0,05
3,2 ± 0,68
90 ± 13,2
15A
Colonization
Maringá
A
0,42 ± 0,02
2,96 ± 0,83
116 ± 27,1
15G
Infektion
Maringá
A
0,42 ± 0,03
3,13 ± 0,81
86 ± 21,9
15 L
Infektion
Maringá
A
0,47 ± 0,08
2,58 ± 0,68
76 ± 16,5
18A
Colonization
Maringá
C
0,56 ± 0,11
3,05 ± 0,67
102 ± 11,2
111 L
Colonization
Natal
C
0,55 ± 0,03
2,6 ± 0,70
80 ± 17,4
111R
Colonization
Natal
C
0,6 ± 0,15
4 ± 0,00
11 ± 3.2
ATCC90028
Referenz
A
0,7 ± 0,08
3,82 ± 0,5
158 ± 17,5
SC5314
Referenz
A
0,52 ± 0,04
3,28 ± 0,81
137 ± 20,6
die Isolate aus der Mundhöhle von Nierentransplantatempfängern von Natal, RN und Maringa, PR, Brasilien erhalten. Candida albicans
Mikro Typisierung
gegen ABC-Genotypisierung kaufen Wir zufällig ausgewählten 48 Isolate von C. albicans
einigen Stämmen einschließlich A gehören (21 von Natal und 10 von Maringa) Genotyp eine alle anderen Genotypen Stämme, B und C aus beiden Regionen und durchgeführt Mikrosatelliten-Genotypisierung. Die genomische DNA von allen der 48 Isolate wurde erfolgreich mit dem M13-Primer amplifiziert, die Genom repetitiven Sequenzen als Ziel hat. Die DNA-Amplifikation gut definierte Bandmuster erzeugt wird, von 100 pb bis 2 kb reichen. Die Mikrotechnik zeigte ausreichende Unterscheidungskraft für die Erkennung innerartliche Variation (Abbildung 1). Wie erwartet, werden die externen Steuer Stämme von C. albicans
, SC5314 und ATCC90028 wurden in völlig verschiedenen Clustern durch die Dendrogramm-Analyse platziert GelCompar II durchgeführt unter Verwendung, um die Effizienz der Technik erweist sich in der Trennung von verschiedenen geografischen Gebieten isolierten Stämme. Diese Kontrollstämme zeigten 75% Ähnlichkeit und wurden zusammen in einem anderen Cluster aller anderen klinischen Isolaten platziert (Abbildung 1). Abbildung 1 ungewichtete Paar-Gruppenmethode mit arithmetischen Mittel Dendrogramm mit 2% Toleranz von 50 Stämmen von Candida albicans klinischen Isolaten.
Wir konnten keine bestimmten Cluster von erkennen entweder zu besiedeln oder infizierenden Stämme. Zusätzlich in beiden Fällen Stämme mit 100% Ähnlichkeit von verschiedenen Patienten erhalten wurden, gefunden. In Bezug auf die Vergleiche von genetischen Verwandtschafts innerhalb der beiden unterschiedlichen geographischen Regionen Brasilien, könnten wir eine angereicherte Cluster für Maringa (Süd), wobei 80% der Stämme wurden zusammen gestellt beobachten. Darüber hinaus sind sie von 80% bis zu 93% Ähnlichkeit zwischen ihnen lag.
Andere interessante Feststellung ist mit einem gewissen Grad der Korrelation zwischen dem ABC-Typ von C. albicans Karten und den hohen Prozentsatz an Ähnlichkeit unter diesen Isolaten beobachtet assoziierten bei Mikrosatelliten-Primer M13 verwendet wurde. In den meisten Fällen, mit gleichen Prozentsatz der Ähnlichkeit mit Primer M13, hatte ebenfalls die gleiche A oder C-Genotyp (außer für die Stämme 02 und 85 von der Natal sowie 15 T und 18A von Maringa bestimmt Stämme; A und C-Genotypen in sowohl Fälle). Darüber hinaus innerhalb von zwei wohldefinierte getrennten Clustern mit bewährten hohen Verwandtschafts (mehr als 90% Ähnlichkeit im selben Cluster) platziert C. albicans
Genotyp C-Stämme von Natal wurden. In Bezug auf Genotyp B, zwei von drei Isolate eine Ähnlichkeit von 94% ergab, in demselben Cluster angeordnet ist (Figur 1).
Wenn ferner verschiedene Stämme aus verschiedenen Proben von dem gleichen Patienten erhalten wurden, hatten sie alle die gleiche ABC-Genotyp (Genotyp A). Trotzdem verwenden Mikrosatelliten-Primer M13 höhere Unterscheidungskraft zeigte, weil diese Stämme nicht mit der neuesten Technik identisch angesehen wurden, einen gewissen Grad an genetischer Variabilität zeigt, wenn dieses Verfahren verwendet wurde.
Virulenz Attribute von Candida albicans
A, B und C Genotypen
für alle Virulenzfaktoren getestet, wir nur statistische Analysen für Vergleiche zwischen den Stämmen gehören, zu Genotypen A und C, wegen der geringen Anzahl von Isolaten Zugehörigkeit zu Genotyp B gefunden. In Bezug Produktion Phospholipase alle Stämme waren in der Lage, das Enzym zu produzieren, unabhängig davon, ob sie von Episoden der Kolonisierung oder Infektion erhalten wurden. Für Genotyp A eine mittlere Pz von 0,51 ± 0,04 erhalten wurde, während für Genotyp C, einem Mittelwert von 0,55 ± 0,05, während für den Genotyp B betrug die mittlere Pz 0,57 ± 0,07. Es wurden keine statistisch signifikanten Unterschiede wurden gefunden, wenn Stämme Genotypen A und C gehören, wurden verglichen (Tabelle 3).
Wenn die Morphologie-Index (MI) verwendet, um Zellen Morphologie, keine klaren Unterschiede beobachtet werden konnte für die drei verschiedenen A, B Score oder C Genotypen. Die Fähigkeit der Stämme, die die Morphologie von Zellen bud Hyphen zu ändern, wenn in Gegenwart von YPD wachsen + 20% FBS für Stämme überprüft wurde, die zu den drei genannten Genotypen. Zellen wurden überwiegend als Pseudohyphen, mit einem Mittelwert gefunden MI im Bereich von 2,66 ± 0,61 (Genotyp C) auf 2,77 ± 0,69 (Genotyp A). Die mittlere MI von Genotyp B-Isolate war 2,67 ± 0,71. Keine statistischen Unterschiede wurden bei den Isolaten (Tabelle 3) beobachtet.
Wir untersuchten auch die Fähigkeit der verschiedenen Stämme Phagozytose durch PMN zu widerstehen. Daher ist es durch 100 PMN phagozytiert die Anzahl der C. albicans
Zellen wurde nach drei Stunden Koinkubation beider Zellen bestimmt. C. albicans
Genotyp C war resistent gegen PMN Angriff. Stämme gehören, B zu genotypisieren hatte durchschnittlich 141.33 ± 14.27 100 PMNs phagozytiert Zellen. Stämme gehören, C Genotyp auf den Angriff von phagozytischen Zellen als die Isolate deutlich resistent waren A gehören zu genotypisieren (109,93 ± 12,29 gegenüber 121,67 ± 16,06, Mittelwert sind; Tabelle 3).
Virulence Attribute von Candida albicans
Stämme aus zwei verschiedenen geografischen Regionen Brasiliens (Nordosten und Süden) erhalten.
Wenn die Pathogenitätsfaktoren unter allen Stämmen aus den beiden geografischen Regionen erhalten verglichen wurden, die von Maringa erhaltenen Stämme (Süd) ausgedrückt effizienter alle Virulenzfaktoren in vitro ausgewertet. Dieser Unterschied wurde als statistisch signifikant für die Resistenz gegen Phagozytose durch PMN (Tabelle 4). Interessanterweise 40% der von Maringa erhaltenen Isolate wurden von Läsionen erhalten, während nur 18,4% der Isolate von Natal wurden infizieren (Tabellen 3 und 4) .Tabelle 4 Virulenz Attribute von Candida albicans-Isolate aus der Mundhöhle von Nierentransplantatempfängern erhalten 0,05.
