Zusammenfassung
Hintergrund
Probiotische Bakterien werden vorgeschlagen, eine Rolle bei der Aufrechterhaltung der Mundgesundheit zu spielen. Solche Gesundheit fördern Bakterien zu verschiedenen kommerziellen probiotischen Produkten hinzugefügt. Das Ziel der Studie war es, die Fähigkeit einer Auswahl von Laktobazillen-Stämme in handelsüblichen probiotischen Produkten verwendet, um zu untersuchen, um das Wachstum von oralen S. mutans und C. albicans in vitro
.
Methoden
Acht probiotischen hemmen Lactobacilli Stämmen zur Wachstumshemmung auf drei Referenzstämmen und zwei klinische Isolate von mutans streptococci sowie zwei Referenzstämmen und drei klinische Isolate von Candida albicans
mit einem Agar-Overlay-Verfahren getestet.
Ergebnisse bei Konzentrationen im Bereich
10
9 bis 10 5 CFU /ml, alle Lactobacillen-Stämme das Wachstum der Streptokokken mutans inhibiert vollständig mit Ausnahme von L. acidophilus
La5, die nur eine leichte Hemmung einiger Stämme bei Konzentrationen ausgeführt entsprechenden bis 10 7 und 10 5 KBE /ml. Auf der untersten Zellkonzentration (10 3 KBE /ml), nur L. plantarum
299v und L. plantarum
931 zeigte eine vollständige Wachstumshemmung, während eine leichte Hemmung durch für alle fünf S. mutans-Stämme zu sehen war L. rhamnosus LB21
, L. paracasei
F19, L. reuteri
PTA 5289 und L. reuteri
ATCC 55730. Alle getesteten Lactobacilli-Stämmen verringert candida Wachstum aber der Effekt war im allgemeinen schwächer als für S. mutans. Die beiden L. plantarum
Stämme und L. reuteri
ATCC 55730 zeigte die stärkste Hemmung auf Candida albicans
. Wurden keine signifikanten Unterschiede zwischen den Referenzstämmen und den klinischen Isolaten beobachtet.
Fazit
Die ausgewählten probiotischen Stämme zeigten eine signifikante, aber etwas unterschiedlicher Fähigkeit, das Wachstum von oralen S. mutans und Candida albicans in vitro
zu hemmen.
Hintergrund
Probiotische Bakterien, als "lebende Mikroorganismen, die in ausreichenden Mengen einen gesundheitlichen Nutzen auf dem Host verleihen verabreicht, wenn" definiert (FAO /WHO 2001), eine Rolle bei der Aufrechterhaltung der Mundgesundheit zu spielen [1, 2 vorgeschlagen werden, ]. Solche die Gesundheit fördern Bakterien zu verschiedenen kommerziellen Milchprodukte wie Milch, Käse und Joghurt sowie Kaugummis und Fruchtgetränken zugegeben. Mögliche Aktionen von probiotischen Bakterien in der Mundumgebung sind Wettbewerb von Bindungsstellen, die Produktion von antimikrobiellen Substanzen, und die Aktivierung und Regulation der Immunantwort [3]. Bakterielle Antagonismus kann auftreten, wenn das Wachstum von einer Bakterienart von Komponenten durch eine andere Spezies produziert behindert wird. Milchsäurebakterien produzieren antimikrobielle Komponenten [4, 5] und einige haben die Fähigkeit zur Produktion von Wasserstoffperoxid (H 2 O 2), die auf Organismen produziert wenig oder kein H giftig sein können 2O 2 -scavenging Enzyme.
Molecular der mündlichen Mikrobiota Analysen haben bei Vorschulkindern, dass Streptococcus mutans gezeigt
signifikant mit der frühen Kindheit Karies [6] verbunden ist. Candida albicans
bei Kindern mit Karies [7] mit einem erheblichen Wachstumsreaktion auf Saccharose Exposition ein hartnäckiges Mitglied der mündlichen Mikrobiota ist [8]. C. albicans
organischen Säuren wie Pyruvat und Acetat produzieren und gelten als einen wesentlichen Beitrag zur müssen caries Pathogenese [9]. Laktobazillen spielen eine bedeutende Rolle in der Mund Ökosystem und können mit oralen Erkrankungen sowie Mundgesundheit [10] verknüpft werden. Seit der Entdeckung von Polonskaya [11], dass L. acidophilus
Wachstum von bestimmten Streptokokken hemmt in vitro
haben klinische Studien bestätigt, dass probiotische Laktobazillen die Grafen von Speichel S. mutans nach der Einnahme von L. rhamnosus
reduzieren GG [12, 13] und L. reuteri
[14-16]. Darüber hinaus natürlich vorkommende Lactobacillus
Arten, darunter L. paracasei, L. plantarum
und L. rhamnosus
, kann das Wachstum von Laborstämmen von S. mutans hemmen sowie Lebewesens autologe S. mutans in vitro
[17]. Hatakka et al [18] festgestellt, dass ein Käse eine Mischung von probiotischen Bakterien verringert, um die Speichelzahl von C. albicans
in einer randomisierten kontrollierten Studie bei älteren enthält.
Das Ziel der vorliegenden Studie war es, die Fähigkeit zu untersuchen, eine Auswahl von Laktobazillen-Stämmen, in handelsüblichen probiotischen Produkten verwendet werden, das Wachstum von S. mutans und C. albicans in vitro
zu hemmen. Die Nullhypothese wurde getestet, dass keiner der Lactobacilli-Stämmen erheblich von den anderen unterscheiden würde.
Methods
Lactobacilli-Stämme und Kultivierung
Acht Stämme von probiotischen Lactobacilli (L. plantarum 299v
, L. plantarum
931, L. rhamnosus GG
ATCC 53103, L. rhamnosus
LB21, L. paracasei
F19 und L. reuteri
PTA 5289, L. reuteri
ATCC 55730 und L. acidophilus
La5) in verschiedenen probiotischen Produkten verwendet wurden ausgewählt (Tabelle 1). Die Bakterien durch die verschiedenen Hersteller in reinen Formen zur Verfügung gestellt wurden (gefrorene Suspensionen oder gefriergetrocknet), mit Ausnahme von L. acidophilus
La5, die von A-fil ® (Arla Ltd, Stockholm, Schweden) isoliert wurde. Die Stämme wurden durch die API 50 CH-System gekennzeichnet (bioMérieux ® SA, Marcy-l 'Etoile, Frankreich), ihre Identität zu bestätigen. Die Bakterien wurden zunächst kultiviert für 16-20 h auf MRS-Agar (de Man, Rogosa, Sharpe, Oxid, Hampshire, England). Eine deutliche Kolonie jedes Bakterium wurde dann für weitere 16-20 h incubation.Table 1 probiotische Laktobazillen-Stämme auf 4,5 ml MRS-Brühe, Hersteller und Produkte in den vorliegenden Experimenten verwendet.
Der Stamm Bei
Produzent
Produkt
L. plantarum
299v
Probi AB, Lund, Schweden
Obst trinken
L. plantarum
931
Essum, Umeå, Schweden
Obst trinken
L. rhamnosus GG
ATCC 53103
Valio Ltd, Helsinki, Finnland
Yogurt
L. rhamnosus
LB21
Essum, Umeå, Schweden
Yogurt
L. paracasei
F19
Arla Ltd, Stockholm, Schweden
Joghurt, Haferbrei, Gruel
L. reuteri
PTA 5289
BioGaia, Stockholm, Schweden
Kaugummi, Tabletten
L. reuteri
ATCC 55730
BioGaia, Stockholm, Schweden
Kaugummi, Gruel, Tropfen, Tabletten
L. acidophilus
La5
Arla Ltd, Stockholm, Schweden
Sauermilch
Mutans Streptokokken, Candida-Stämme und Kultivierung
Fünf Stämme von S. mutans ( MS) einschließlich der beiden Laborreferenzstämme (S. mutans
NCTC 10449, S. mutans
Ingbritt und S. sobrinus
OMZ176) und klinischen Isolaten (S. mutans
P1: 27 und S. mutans
P2: 29) auf Blutagarplatten (Columbia Blutagarbasis, Alpha BioScience, Baltimore, USA), ergänzt mit 5% Pferdeblut waren während 16-20 Stunden und am folgenden Tag, reine Kolonien jedes Bakterium kultiviert wurden übertragen zu 2 ml Todd-Hewitt-Brühe (Oxid, Hampshire, England) und inkubiert für weitere 16-20 Stunden. Fünf Stämme von Candida albicans
einschließlich der beiden Referenzstämme (C. albicans
ATCC 28366, C. albicans
ATCC 10231) und klinischen Isolaten (C. albicans
1957, C. albicans
3339 und C. albicans
GDM8) wurden auf Difco ™ Sabourad Maltose-Agar (Becton, Dickinson and complany, Sparks, USA) über Nacht und am folgenden Tag, reine Kolonien jeder Hefe wurden auf 2 ml Difco ™ Sabourad Maltose-Brühe und für 16-20 Stunden inkubiert. Die Stämme
C. albicans wurden durch die API Candida (bioMérieux ® SA, Marcy-l'Etoile, Frankreich) aus. Anzucht von Lactobacilli und Streptococci mutans wurden in anaerober Atmosphäre (10% H 2, 5% CO2 und 85% N2) in einer anaeroben Kammer bei 37 ° C durchgeführt, während das Kultivieren von C. albicans
unter aeroben Bedingungen bei 37 ° durchgeführt wurde, C.
Agar Overlay Störtests
Die Bouillonkulturen von Laktobazillen wurden seriell in verzehnfacht Schritten verdünnt. Die optische Dichte (OD) bei 630 nm gemessen wurde, 10 mit einem Spektrophotometer bei Verdünnung mit -1 (Ultrospec 100 pro, Spektralphotometer für sichtbares Licht, Biochrom Ltd. Cambridge, England). Das unverwässerte Suspension und Zellsuspensionen auf etwa 10 entsprechende 9, 10 7, 10 5 und 10 3 KBE /ml wurden in den Hemmexperimente verwendet. Ein ml jeder Laktobazillen Suspension wurden in sterile 24 ml geschmolzener MRS-Agar (ca. 45 ° C) und die Platten wurden gegossen. Wenn der Agar gesetzt war, wurden die Platten bei 37 ° C über Nacht in anaeroben Atmosphäre inkubiert. Am nächsten Tag, eine zweite Schicht aus Agar 23 ml M17-Agar mit 10% steril filtriert Laktose (Mai und Baker, Dagenham, England) ergänzt molted auf dem MRS-Agar mit erwachsenen Laktobazillen gegossen wurde. Die Platten wurden 3 Stunden lang bei Raumtemperatur trocknen gelassen. Bouillonkulturen von MS gezüchtet für 16-20 Stunden in Todd-Hewitt-Bouillon wurden in dem gleichen Medium verdünnt, und die OD wurde bei 500 nm und auf 0,2 gemessen. Die Suspensionen von MS wurden mit Steer-Replikator (CMI-Promex ICN, Pedricktown, USA) auf den Platten gestempelt. Die Platten wurden bei Raumtemperatur stehen gelassen für 1 Stunde trocknen lassen und wurden anschließend bei 37 ° C in die anaerobe Kammer über Nacht inkubiert. Um zu testen, um die Anfälligkeit von C. albicans
, 24 ml Difco ™ Sabourad Maltose-Agar (SAB) wurde oben auf dem MRS-Agar mit erwachsenen Laktobazillen gegossen. Broth-Kulturen von C. albicans Hüllen für 16-20 h in Difco ™ Sabourad Maltose-Bouillon gezüchtet wurden in dem gleichen Medium verdünnt, und die OD wurde bei 500 nm gemessen und auf 0,2. Die Suspensionen wurden dann in der gleichen Weise wie MS (siehe oben) auf den Platten ausgestanzt. Die Platten inokuliert mit C. albicans
wurden bei 37 ° C in Luft inkubiert. Als Kontrollen wurden die MS und C. albicans
Stämme auf Agarplatten ohne Laktobazillen gestempelt innerhalb der ersten Agar-Schicht.
Alle Tests in zweifacher Ausfertigung hergestellt wurden und jedes Experiment wurde bei drei verschiedenen Gelegenheiten wiederholt. Die Ergebnisse der Agar-Overlay-Tests wurden wie folgt kategorisiert nach Simark-Mattsson et al. [17]: Score 0 = vollständige Hemmung (keine sichtbaren Kolonien), Score 1 = leichte Hemmung (mindestens eine sichtbare Kolonie aber auf jeden Fall kleinere Mengen dann in der Steuerplatte) und 2 Score = keine Hemmung (das gleiche Wachstum wie auf der Steuerplatte). Die Auswertung der Platten wurde von zwei unabhängigen Beobachtern bei Uneinigkeit durchgeführt Konsens nach einer Diskussion erreicht wurde. PH-Messungen
Als Abschätzung der Laktobazillen Säureproduktion, die Oberfläche pH-Wert der MRS-Platten mit M17
und SAB-Agar wurde vor und nach der letzten Inkubation jedes Laktobazillen Stamm bestimmt, aber ohne S. mutans oder Candida. Ein pH-Meter (Seven Easy pH-Wert, Mettler-Toledoo GmbH, Schwerzenbach, Schweiz) mit einer flachen Elektrode ausgestattet verwendet wurde, und dem Mittelwert von zwei Messungen berechnet wurde.
Statistische Verfahren
Die Daten mit der SPSS-Software verarbeitet wurden (Version 17.0, Chicago Ill, USA) und Chi-Quadrat-Tests unterzogen. Ein p-Wert & lt; 0,05 als statistisch signifikant betrachtet wurde.
Ergebnisse
