Zusammenfassung
Hintergrund
Mutans Streptokokken (Streptococcus mutans
und S. Sobrinus
) gelten als Haupt Erreger von Karies. Mit Hilfe einer Polymerase-Kettenreaktion-Methode entdeckten wir diese Bakterien von 145 ambulanten Patienten (6-30 Jahre) mit geistiger Behinderung (ID) und ihre Anwesenheit war im Vergleich mit dem Auftreten von Zahnkaries.
Methoden
Plaque-Proben wurden gesammelt von allen ausgebrochen Zahnlücken bei Patienten mit einer sterilen Zahnbürste. Eine zahnärztliche Untersuchung wurde durchgeführt, um die Anzahl der verfallenen und gefüllte Zähne (DFT-Score) in bleibenden Gebiss, um zu bestimmen die Verwendung von WHO diagnostischen Kriterien Karies. Ein Mann-Whitney-U-Test verwendet wurde, um die Karies-Scores zwischen Kombinationen der Bakterien zu vergleichen und mit einem Rang-Test Wilcoxon verwendet, um Karies Scores zwischen der Basislinie und nach 1 Jahr vergleichen.
Ergebnis einschränken Unter allen Fächern, S. mutans
und S. sobrinus
wurden von 78,7 und 83,5% besaß, beziehungsweise, während 13,1% für S. mutans positiv waren
allein, 17,9% für S. sobrinus
allein und 65,6 % für beide Organismen, mit 3,4% waren für beide negativ. Die mittlere DFT-Score von positiven Probanden für beide S. mutans
und S. Sobrinus
auf nach 1 Jahr war signifikant höher als die derjenigen positiv für S. mutans
allein (P
& lt; 0,01 ). Der Anstieg der Karieszuwachs war auch signifikant höher bei Patienten mit beiden nachgewiesenen Bakterien (P
& lt; 0,001).
Fazit
Unsere Ergebnisse zeigen, dass Patienten mit ID beherbergen beide S. mutans Karten und S. sobrinus
haben eine deutlich höhere Inzidenz von Karies als solche mit S. mutans
allein.
Hintergrund
mutans Streptokokken (Streptococcus mutans
und S. sobrinus
) gelten als Haupt Erreger von Karies bei Menschen [1-3]. Diese Bakterien sind die häufigsten isolierten mutmaßlichen Erreger von Zahnbelag und ihre Prävalenz in epidemiologischen Studien berichtet [4-7]. Es wurden verschiedene Verfahren zum Nachweis von Pathogenen putative, einschließlich direkte Mikroskopie, Anbau, Enzymtests, Enzyme-linked Immunosorbent Assays und artspezifische DNA-Sonden verwendet. Mehrere Forscher haben auch die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) Verfahren entwickelt und berichtet sie für den Nachweis empfindlicher zu sein als mit herkömmlichen Kulturtechniken verglichen [8, 9], wie sie zum Erfassen niedrigen Zahlen (5-100) in der Lage erwiesen haben von Bakterienzellen [9, 10], während sie sind auch schnell und relativ einfach durchzuführen. Darüber hinaus wurden PCR-Assays geeignet für den spezifischen Nachweis und zur Identifizierung von humanen kariogenen Bakterien gefunden worden, darunter S. mutans
und S. Sobrinus
[10, 11].
In früheren Querschnitts- und Längsschnittstudien, berichteten wir, dass Vorschulkinder mit Milchgebiß beherbergen beide S. mutans
und S. sobrinus
hatten eine signifikant höhere Inzidenz von Karies als solche mit S. mutans
allein [6, 12]. Vor kurzem haben wir auch festgestellt, dass Schüler sowohl S. mutans
und S. Sobrinus
hatten eine signifikant höhere Karies Erfahrung in beiden permanenten und primären Zähne zu denen mit S. mutans im Vergleich zu beherbergen
allein [13] . Die Identifizierung und Bestimmung der Prävalenz dieser Erreger sind von grundlegender Bedeutung für die Initiierung und Entwicklung der Zahnkaries zu verstehen, und für bessere Formen der Behandlung und Prävention bestimmen. Doch nur wenige Langzeitstudien der Beziehung zwischen diesen beiden Arten und Karies Aktivitäten bei Kindern [12, 14] oder Personen mit geistiger Behinderung (ID) [15] und Down-Syndrom [16] durchgeführt wurden.
Personen mit dem ID, werden von Familienmitgliedern zu Hause gepflegt auch von schlechter Mundhygiene leiden können, da höhere Keimzahlen bei Patienten mit ID denen ohne Behinderung im Vergleich gefunden wurden [17]. Die Methoden zur Verfügung zu behandeln und Karies zu verhindern, und die Mundhygiene Einzelpersonen verbessern mit schweren Behinderungen sind begrenzt. Es ist jedoch wichtig für Kliniker unter den verschiedenen Techniken zur Verhinderung von Zahnkaries in ihre Patienten mit ID gemäß Risiko zu wählen. In der vorliegenden Studie haben wir festgestellt S. mutans
und S. Sobrinus
bei japanischen Patienten mit ID ein PCR-Verfahren verwendet und verglichen dann ihre Anwesenheit mit dem Auftreten von Karies über einen 1-Jahres-Zeitraum.
Methoden
Einhundert fünfundvierzig ambulanten Patienten mit ID (ein Intelligenzquotient (IQ) ≤ 70) im Alter von 6 bis 30 Jahren und jeweils mit gemischten oder bleibenden Zähne, die eingeschrieben waren Hiroshima University Hospital, Hiroshima City besucht. Die demographischen Details der beteiligten ambulanten Patienten und Daten über ihre Behinderungsstatus, IQ, systemische Erkrankungen und die Geschichte der Medikamente ein (falls vorhanden) wurden aus den medizinischen Unterlagen gesammelt. Die Probanden wurden von 135 mit ID besteht und 10 mit dem Down-Syndrom, und insgesamt 106 (73,1%) Männern und 39 (26,9%) Weibchen wurden untersucht (Tabelle 1). Die Zustimmung zur Teilnahme wurde von mindestens einem ihrer Eltern vor der Studie nach den ethischen Richtlinien der Deklaration von Helsinki (1975) und ethische Freiheit erhalten wurde von der Ethikkommission der Universität Hiroshima (Epidemiologie-Nr. 34) erhalten. Jeder Proband unterzog sich einer zahnärztlichen Untersuchung in der durch eine einzige Zahnklinik Spezialpflege durchgeführt gut ausgebildete Zahnarzt (MO), während in Rückenlage in einem Behandlungsstuhl sitzt, mit der WHO diagnostischen Kriterien Karies die verfallene und gefüllte Zähne (DFT), um zu bestimmen Index [18]. Diejenigen, die Antibiotika in den letzten 3 Monaten oder mit systemischen Erkrankungen waren excluded.Table 1 Studie Bevölkerung nach Alter und Geschlecht
erhalten hatte Age
Male
Female
Total
(years)
No.
%
No.
%
6–10
12
92.3
1
7.7
13
11–15
19
86.4
3
13.6
22
16–20
21
77.8
6
22.2
27
21–25
32
69.6
14
30.4
46
26–30
24
64.9
13
35.1
37
Zahnplaque gesammelt wurde aus all Zähne ausgebrochen, indem sie mit einer sterilen Zahnbürste für 1 min Bürsten eines zuvor beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von [19]. Während des Zähneputzens, wurde auf die Zahnbürste Plaque anhaftende durch mehrmaliges Waschen in einem Rohr aus sterilem destilliertem Wasser entfernt. Die Plaque-Proben in das Röhrchen wurden sofort in unserem Forschungslabor transportiert und bei -20 ° C, vor der Extraktion der genomischen DNA gespeichert.
Streptococcus mutans
JCM5175 und S. sobrinus
ATCC27607 als Kontrollspezies verwendet wurden . PCR-Nachweis der Zielspezies wurde unter Verwendung von Igarashi beschrieben Primern durchgeführt et al. [8, 10]. Oligonukleotid-Primer wurden an die dex
DNA-Sequenz von
S. mutans entworfen (GenBank Zugangs-Nr. D49430) und S. Sobrinus
(GenBank Zugangs-Nr. M96978). Für S. mutans
ist der Vorwärts-Primer, 5 'TAT GCT GCT ATT GGA GGT TC 3', komplementär zu der Sequenz von 973 bis 992 und die umgekehrt Primer, 5 'AAG GAG GTT CAA TTG AAT CG-3', komplementär ist, 2225-2244 der Sequenz. Für S. sobrinus
, der Vorwärts-Primer, 5 'TGC TAT CTT TCC CTA GCA TG 3' ist, komplementär zu der Sequenz von 134 bis 153 und der umgekehrt Primer, 5 'GGT ATT CGG TTT GAC TGC 3', ist, komplementär zu der Sequenz von 1726 bis 1743. die Primer für Eubakterien 16S ribosomalen RNA-Sequenz
(GenBank Zugangsnummer M75035) wurden das Vorhandensein von Bakterien in der Plaque-Proben als Positivkontrolle [20] zur Bestätigung verwendet. Der Vorwärts-Primer, 5 'CAG GAT TAG ATA CCC TGG TAG ACG TCC C-3', komplementär zu der Sequenz von 783 bis 810 und der umgekehrt Primer, 5 'GAC GGG CGG TGT GTA CAA GGC CCG GGA ACG-3', komplementär zu der Sequenz 1378-1407. Die Größe des erwarteten PCR-Produkt war 625 bp.
Plaqueproben wurden zuerst für 20 min bei 1600 × g
zentrifugiert. Danach wurde Überstand verworfen und Einzelzellpellets wurden bei -20 ° C, bis die DNA-Isolierung gespeichert, für die die Pellets in 180 & mgr; l der Enzym Lysepuffer resuspendiert (20 mM Tris-HCl, pH 8,0; 2 mM EDTA; 1,2% Triton X-100, 20 mg /ml Lysozym). Eine genomische DNA-Präparation von jedem Plaque-Probe wurde unter Verwendung eines DNeasy ® Blood and Tissue Kit (Qiagen, Austin, TX, USA) für die DNA-Extraktion von Gram-positiven Bakterien erhalten wird, auf die wir zugegeben, um eine RNase-Behandlung [21]. DNA-Konzentrationen in den Zahnbelag Proben wurden bestimmt durch eine
Messung
260, während Qualität geschätzt wurde die
A mit 260 /A
280 Verhältnis [22].
Polymerase-Kettenreaktion-Amplifikation wurde in einem Reaktionsgemisch (25 ul), bestehend aus PCR Beads (GE Healthcare UK Limited, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK), das ein Enzym enthielt (zwei Einheiten von Taq DNA-Polymerase
) und die erforderliche geführt Reagenzien, sowie 25 pmol jedes Primers und 20 bis 50 ng der Templat-DNA-Lösung in einem Thermocycler (PTC-DNA Motor 220 DYAD TM, MJ Research, Hatoboro, PA, USA). Jeder Satz von PCR-Analysen eine Negativkontrolle (Wasser leer) zusätzlich zu der positiven Kontrolle enthalten. Das Reaktionsgemisch wurde bei 95 ° C mit 26 Zyklen Denaturierung für 3 min, gefolgt für 1 min, Annealing für 1 min und Verlängerung für 1 min bei 72 ° C bei 55 ° C bei 95 ° C denaturiert, mit einem letzten Zyklus von 94 ° C für 1 min, 55 ° C für 1 min und 72 ° C für 5 min [8]. Nach der Amplifikation, 15 & mgr; l der PCR-Produkte wurde durch Elektrophorese auf einem Gel 1,0% Agarose untersucht und nach Anfärbung mit Ethidiumbromid wurden die neu synthetisierten DNA-Fragmente unter UV-Licht bei 302 nm sichtbar gemacht. Die Grßen der PCR-Produkte wurden aus der elektrophoretischen Wanderung der Produkte relativ zu einer 100-Basisleiter marker (Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Schweden) bestimmt. Die Empfindlichkeit der PCR-Methode wurde unter Verwendung von bekannten Mengen von gereinigtem S. mutans
JCM5175 und S. sobrinus
ATCC27607 als Matrize getestet. Seriell verdünnt DNA als Matrize verwendet wurde, und die Nachweisgrenze war 1 pg der DNA von S. mutans
(12 Zellen) und 100 fg Matrizen-DNA für S. sobrinus
(9 Zellen) (Daten nicht gezeigt).
Beschreibende Statistik und statistische Analysen wurden unter Verwendung eines Software-Statistikpaket (SPSS 14.0, Inc., Chicago, IL, USA) durchgeführt. Ein Mann-Whitney-U-Test wurde verwendet, um die Karies-Scores zwischen den Fächern besitzen, die die verschiedenen Kombinationen von Bakterien zu vergleichen und ein Wilcoxon-Rank-Test Karies Scores zwischen der Basislinie und 1 Jahr später zu vergleichen.
Ergebnisse
