ABSTRACT
Der Zweck dieser Studie ein Enzym-Immunoassay zu verwenden, war die Diffusion von Tetracyclin, um zu bestimmen, ob durch Wurzeldentin von extrahierten menschlichen Zähnen auftritt. Einundzwanzig Wurzeln wurden mechanisch hergestellt und dann in drei Gruppen aufgeteilt: experimental (G1; n = 15; Tetracyclin-imprägnierte Guttapercha (TGP) mit MCS sealer); Negativkontrolle (G2; n = 3; Ebene Guttapercha mit MCS Sealer) und MCS Steuerung (G4; n = 3; TGP ohne Versiegelung). Alle Wurzeln wurden koronal verschlossen und dann in Kochsalzlösung eingetaucht. Drei weitere Proben wurden als positive Kontrolle verwendet (G3; n = 3; eine freie TGP cone n saline). Die Ergebnisse zeigten deutlich mehr Tetracyclin Diffusion zwischen Gruppe 3 und allen anderen Gruppen. Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen 1, 2 und 4. Maximale Diffusion bei 24 Stunden beobachtet wurde, jedoch sank die Rate der Diffusion deutlich ab. Zähne obturiert mit TGP und MCS Versiegelung zeigten keine Diffusion von Tetracyclin über einen Durchschnitt von 0,006 g /ml innerhalb der Zeitrahmen getestet.
Pathways Übertragung von Krankheiten zwischen den Zahnhalteapparat und Wurzelkanalsystem kann durch Patent auftreten Quer- und Seitenkanäle, al Dentintubuli oder apikal formamina.1 Simon et. (1972) vorgeschlagen, eine Klassifizierung von endodontischen-periodontic Läsionen und schlug vor, dass die Behandlung dieser Zähne erfordern sowohl endodontischen und periodontic therapy.2 Als endodontischen Behandlung sehr wirksam ist, wenn sie richtig durchgeführt wird, wird die Prognose hängen in der Regel von der Menge der knöchernen Unterstützung von der verlorenen Parodontitis und die Fähigkeit der Parodontalbehandlung begleitet die Rest defect.3 parodontale Therapie zu lösen können gründliche Wurzel debridement, systemische oder lokale Abgabe von Antibiotika und Antiseptika, Wurzelspitzenresektion, regenerative Therapie oder Zwangs Ausbruch umfassen.
Systemic und lokal geliefert Tetracyclin wurde in der Behandlung von verschiedenen Arten von parodontalen Erkrankungen, die refractory.4 Es hat ein breites Aktivitätsspektrum gegen viele gram-positive und gram-negative Bakterien verwendet. Systemische Verabreichung von Tetracyclin neigt in Knochen und Zähnen aufgrund seiner Fähigkeit, mineralisierte dentinal Matrices und seine langsame Freisetzung aus Dentin macht seine antimikrobielle Wirkung substantiv binden zu konzentrieren. Wiederholte Dosen von oral tetracylcine wurden gefunden Sulkusflüssigkeit Niveaus zu erreichen, die zwei zu vier mal der Blutspiegel, so dass ein Reservoir über dem minimalen Hemmkonzentration für die meisten pathogenen Bakterien in der Mund cavity.4-6
gefunden Schaffung
Darüber hinaus Tetracyclin, anders als die meisten alkalische antimikrobielle Mittel ist, stabil in sauren Umgebungen und bleibt wirksam bei entzündeten periradikulären tissue.7 Tetracycline auch Kollagenase-Aktivität zu hemmen und so Knochenresorption gefunden.
Eine weit verbreitete lokal periodontal geliefert Faser mit Tetracyclin imprägniert ist Actisite (Alza Corp., Palo Alto, CA). Diese Fasern werden in subgingivalen periodontalen Taschen eingeführt weitere Konzentrationen in der Zahnfleischtaschenflüssigkeit erhöhen und kann Konzentrationen von mehr als 1300 g /ml für 10 Tage aufrechterhalten, 5 eine Konzentration, die weit über die minimale inhibitorische Konzentration (MIC) Bereich von 0.016- 2,000 g /ml benötigt Wachstum von 90 Prozent der parodontalen und endodontischen Krankheitserregern in vitro.8 Studien zur Hemmung zeigen, dass die kombinierte Therapie von Skalierung und Wurzelglättung und Tetracyclin Fasern führt zu deutlich weniger Stellen der Krankheitsprogression nach einem Jahr der Überwachung im Vergleich zu Skalierung und Wurzelplanierung alone.9 Außerdem lokale Auslieferung von Tetracyclin minimiert das Potenzial für Arzneimittel resistance.10
Entwicklung
von einer endodontischen Sicht iodoform haltige Guttapercha, MGP (Lone Star Technologies, Westport, CT) und mehr vor kurzem, Tetracyclin-imprägnierte Guttapercha (TGP), (Medidenta international Inc., Woodside, NY) haben, um von Dr. Howard Martin patentiert worden bakterielle Kontamination nach endodontischer treatment7 zu verhindern (Abb. 1). Darüber hinaus empfiehlt Dr. Martin seine TGP in Kombination mit seiner patentierten iodoform haltigen Zinkoxid-Eugenol-Sealer verwenden, MCS, (Lone Star Technologien, Westport, CT), wenn verschließe Zähne mit langjähriger infections.11
Studien haben gezeigt, dass viele Techniken der Dichtungsapplikation nur zur Deckung von 25% bis 75% des Kanals verwalten walls.12 Außerdem Versiegelungen gezeigt wurde, bei längerer Einwirkung auf das Gewebe zu resorbieren fluid.13 Es ist somit wahrscheinlich, dass Portale von Austrittspatent bleiben, durch die parodontale und periapikale Gewebe können in direkten Kontakt mit TGP kommen. Diese Quelle der Feuchtigkeit würde theoretisch TGP aktivieren und die Freisetzung von Tetracyclin verursachen. Das Tetracyclin würde dann diffundieren durch und bindet an Seitenkanälen oder Dentintubuli als Reservoir des materiellen tetracycline.7
handeln
Da Tetracyclin die Fähigkeit Dentin diffundieren und binden, 7 TGP kann das Potenzial haben, verwendet werden, als neue in klinischen Situationen Drug-Delivery-System vor Ort sowohl Endodontie und parodontalen Therapie erfordern.
Das Ziel dieser Studie war es, ein Enzym-Immunoassay verwendet werden, um zu bestimmen, ob die Diffusion von Tetracyclin durch Wurzeldentin von extrahierten menschlichen Zähnen tritt obturiert mit TGP und MCS Sealer
Material und Methoden
Phase 1:. Probenvorbereitung und Salzprobensammlung
Einundzwanzig vor kurzem extrahierte menschliche Zähne wurden ausgewählt für die Studie und in Leitungswasser gespeichert. Die Zähne waren im Typ von centrals auf den zweiten Molaren. Die Kronen wurden entfernt, alle kariöse Läsionen wurden eliminiert und mehrwurzeligen Zähne wurden in einzelne Wurzeln geschnitten. Es wurde kein Versuch gemacht, die Desmodonts zu bewahren. Alle individuellen Wurzeln wurden auf dem koronalen modifiziert 13mm Wurzelproben erstellen (2A & amp;. B). Alle Proben wurden 30 Minuten bei 250F autoklaviert, auf 15 PSI vor der Reinigung und Formgebung. Ein Bediener vorbereitet jede Probe aseptisch mit rotierenden Instrumenten mit 0,6 Kegel Profil Serie 29 (Dentsply Tulsa Dental, USA). Das Foramen wurde auf 0,35 mm vergrößert. Fünf ml von 6,0% igem Natriumhypochlorit wurde während der Reinigungs- und Formgebungsverfahren eingesetzt. Siebzehn Prozent EDTA wurde eine Minute lang in allen vorbereiteten Kanäle einweichen gelassen die Schmierschicht zu entfernen. Alle Kanäle wurden mit Papierspitzen getrocknet und zufällig in Versuchs- und Kontrollgruppen eingeteilt. Alle Proben wurden mit kaltem lateralen Kondensation obturiert.
Die experimentelle Gruppe (G1) bestand aus 15 Proben, die mit Tetracyclin-imprägnierte Guttapercha (TGP) und MCS Versiegelung verschlossen wurden. Gruppe zwei (G2) war die negative Kontrolle und besteht aus drei Proben, die verschlossen wurden unter Verwendung von nicht-medizinischen Guttapercha und MCS Versiegelung. Gruppe 3 (G3) war die positive Kontrolle und bestand aus drei frei stehenden TGP Kegel. In der Gruppe vier (G4) wurden drei Proben obturiert TGP Verwendung ohne Versiegelung. Die koronalen aller Wurzelproben wurden für 15 Sekunden mit 37% Phosphorsäure-Gel (Ätzgel, Kerr, Orange, CA) konditioniert, gründlich rinced fünf Sekunden lang und leicht durch leichtes Blasen mit Luft getrocknet. Optibond Solo (Kerr, Orange, CA) Bindungssystem wurde entsprechend angewendet Anweisungen des Herstellers und Licht für 20 Sekunden gehärtet. Charisma Füllungsmaterial (Heraeus-Kulzer, Hanau, Deutschland), Farbe A3, wurde dann stufenweise auf die Klebefläche und Licht für 40 Sekunden nach jedem Schritt geheilt angewendet.
Nach Obturationstechniken, G1, G2 und G4-Proben wurden sofort für 24 Stunden in 100% Luftfeuchtigkeit gelagert und dann in individuell beschriftet, versiegelt und sterilisiert 15 ml Kunststoff-Teströhrchen mit 10 ml steriler 0,9% Kochsalzlösung gefüllt übertragen. Zu diesem Zeitpunkt wurden G3 freistehende TGP Kegel in ihre einzelnen Teströhrchen mit 10 ml sterilem 0,9% Kochsalzlösung gefüllt war. Alle Teströhrchen wurden in Aluminiumfolie eingewickelt Lichteinwirkung zu minimieren. Die Röhrchen wurden dann in einem Inkubator bei 37 ° C für bestimmte Zeitintervalle gelegt. 24 h, 48 h, 96 h, 1 Woche und 4 Wochen
Am Ende jedes Zeitintervalls wurden beide Test- und Kontrollproben entfernt aus ihren Röhren die Salzlösung und den Rohren enthalten, wurden in der Tiefkühltruhe in Aluminium und gespeichert umgebrochen. Alle Proben wurden dann in neue einzeln beschriftet platziert versiegelt und 15 ml Kunststoff-Teströhrchen mit 10 ml frisch, sterile 0,9% Kochsalzlösung gefüllt sterilisiert. Aluminium wurde wieder verwendet jedes Rohr zu wickeln. Alle neuen Rohre wurden wieder in den Inkubator bis zum nächsten Zeitintervall untersucht diesen Prozess zu welchem Zeitpunkt wurde wiederholt platziert ..
Phase 2: Ridascreen Tetrazyklin kompetitiven ELISA (R-Biopharm Inc, South Marshall MI,)
eine Pilotstudie zunächst in der Reihenfolge der einzelnen Tests, um zu bestimmen, welche Verdünnung abgeschlossen wurde und Salzprobe Kontrolle wurde erforderlich, um eine Konzentration im Bereich zwischen 0,15 und 1,35 g /kg oder Teile zu produzieren pro Milliarde (ppb). Dieser Konzentrationsbereich entspricht dem linearen Abschnitt der Eichkurve in Graph 1. Eine Reihe von Standard Tetracyclin Konzentraten von 0 gezeigt, 0,05, 0,15, 0,45, 1,35 und 4,05 ppb in einer Pufferlösung (in dem Kit bereitgestellt Ridacreen Tetracyclin) verwendet die Eichkurve zu erzeugen. Die Standard-Konzentrate werden laufen zusammen mit allen samples.14
Jeder Ridascreen Kit enthält 96 Vertiefungen von Mikrotiterplatten mit einer Probe pro Vertiefung. Jede Probe wird zweifach getestet. Vier Ridascreen Kits wurden insgesamt verwendet, und die Vertiefungen wurden in Mikrotiter Haltern angeordnet. Fünfzig l Standard, Versuchs- und Kontrollproben wurden in jede Vertiefung gegeben. Fünfzig l anti-Tetracyclin-Antikörperlösung wurde dann zu jeder Vertiefung zugegeben und die Lösungen wurden vorsichtig gemischt und für eine Stunde bei Raumtemperatur stehen. Nach einer Stunde wurden die Lösungen aus jeder Vertiefung und alle Restflüssigkeit gegossen wurde durch Antippen der Mikrotiterplatten-Inhaber den Kopf auf einem Papiertuch entfernt. Die Vertiefungen wurden dann mit PBS-Puffer mit Tween gewaschen. Einhundert l Enzymkonjugat wurde dann zugegeben und vorsichtig gemischt. Diese Lösung wurde 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen. Nach 15 Minuten gegossen wurden die Lösungen wieder, und alle Restflüssigkeit wurde durch Antippen der Mikrotiterplatten-Inhaber den Kopf auf einem Papiertuch entfernt. Die Wells wurden wieder mit PBS-Puffer mit Tween und 50L Chromogen gewaschen wurde zu jeder Vertiefung zugegeben. Die Vertiefungen wurden sanft gemischt und für 15 Minuten im Dunkeln zu sitzen. Nach 15 Minuten 100L Schwefelsäure Stoppreagenz 1N zugegeben und vorsichtig gemischt. Die Extinktion wurde bei 450 nm unter Verwendung einer Mikrotiterplatten-Spektrophotometer gemessen und ist umgekehrt proportional zu der Konzentration von Tetracyclin in den Standards oder Proben. Ein Luft Rohling wurde zum Vergleich verwendet. Die Absorption wurde der Zugabe des Stop-Reagenz innerhalb von 60 Minuten abgelesen. Die Konzentration von Tetracyclin in g /kg in jeder Probe wurde dann aus der Eichkurve erhalten, um die Mittelwerte der Extinktion verwendet wird. Die tatsächliche Konzentration von Tetracyclin in jeder Probe wurde durch einen entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert und umgerechnet in g /ml.14
STATISTISCHE ANALYSE
Die Daten wurden in ein Tabellenkalkulationsprogramm gesammelt und gespeichert und codiert für statistische Analyse. Datenberechnung wurde mit SYSTAT v11 für Windows (SYSTAT Software, Inc, Point Richmond, CA) vorgeformt. Sowohl der deskriptiven Statistik und Zwei-Faktor-ANOVA durchgeführt.
Ergebnisse